犬乳腺腫瘤作為臨床上一種常見的疾病,與人乳腺腫瘤有很多相似之處,以其作為模型進行摸索,對人乳腺腫瘤的研究具有重大意義。近年來,對犬乳腺腫瘤細胞雖有研究,并取得了相應成就,但細胞周期同步化與周期調(diào)控機理仍有待研究。血清饑餓法和胸腺嘧啶核苷（TdR）雙阻斷法是使細胞同步于特定階段的有效方法,但該法是否適用于犬乳腺腫瘤細胞至今尚未報道。紫杉醇作為20世紀天然抗腫瘤新藥,現(xiàn)已普遍應用于人卵巢癌、乳腺癌、非小細胞肺癌、及黑色素瘤的臨床治療中。其突出的療效更是引起人們的廣泛注意。但是紫杉醇對犬乳腺腫瘤細胞周期及腫瘤相關因子的影響還有待進一步證實。本實驗就此一系列問題展開深入研究。實驗采用體外培養(yǎng)的犬乳腺腫瘤細胞為研究對象,經(jīng)0%、0.1%、0.2%、0.5%、1%和10%胎牛血清（FBS）的DMEM分別作用24h、32h、42h和54h,采用光學顯微鏡觀察細胞形態(tài)學變化,通過碘化丙啶（PI）染色和流式細胞術檢測不同條件下G0/G1期同步化效果。使用2.5mmol/L TdR檢測其對犬乳腺腫瘤細胞周期的同步化作用。采用濃度為0.1μmol/L和0.05μmol/L的紫杉醇分別作用24h、48h、72... 

【文章來源】：東北農(nóng)業(yè)大學黑龍江省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：57 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 前言
    1.1 犬乳腺腫瘤研究現(xiàn)狀
    1.2 細胞周期同步化
        1.2.1 血清饑餓同步化
        1.2.2 胸腺嘧啶核苷(TdR)同步化
    1.3 紫杉醇
    1.4 細胞周期調(diào)控及相關因子
        1.4.1 細胞周期
        1.4.2 細胞周期調(diào)控
        1.4.3 細胞周期檢驗點
        1.4.4 腫瘤細胞周期的缺陷
    1.5 本研究的目的及意義
2 材料與方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 細胞系
        2.1.2 主要實驗器材
        2.1.3 主要試劑
        2.1.4 主要試劑的配制
        2.1.5 實驗前的準備工作
    2.2 實驗方法
        2.2.1 細胞的凍存、復蘇與傳代
        2.2.2 細胞計數(shù)
        2.2.3 實驗分組設計
        2.2.4 犬乳腺腫瘤細胞的形態(tài)學變化
        2.2.5 犬乳腺腫瘤細胞周期同步化的研究
        2.2.6 紫杉醇對細胞周期的影響
        2.2.7 實時熒光定量PCR檢測周期相關因子
    2.3 實驗數(shù)據(jù)的分析與統(tǒng)計
3 實驗結果
    3.1 犬乳腺腫瘤細胞形態(tài)的變化
        3.1.1 血清饑餓對犬乳腺腫瘤細胞形態(tài)的影響
        3.1.2 TdR對犬乳腺腫瘤細胞形態(tài)的影響
        3.1.3 紫杉醇對犬乳腺腫瘤細胞形態(tài)的影響
    3.2 G_0/G_1期同步化結果
    3.3 S、G_2/M期同步化結果
    3.4 紫杉醇作用后細胞周期分布情況
    3.5 P_(27)、P_(53)、BCL-2表達差異的檢測結果
        3.5.1 定量標準曲線的建立及溶解曲線的分析
        3.5.2 P27、P53、bcl-2的熒光定量PCR檢測結果
4 討論
    4.1 犬乳腺腫瘤細胞的形態(tài)影響
    4.2 血清饑餓及TDR對犬乳腺腫瘤細胞的同步化影響
    4.3 紫杉醇對犬乳腺腫瘤細胞周期的影響
    4.4 紫杉醇對腫瘤相關因子的影響
5 結論
致謝
參考文獻
附錄
攻讀碩士學位期間發(fā)表的論文


【參考文獻】：
期刊論文
[1]接觸抑制和血清饑餓對細胞周期的影響[J]. 任亮,劉娣,付博,房慶昌,郭云云,馬紅,汪亮,李忠秋,李璐.  黑龍江畜牧獸醫(yī). 2012(03)
[2]Cyclin D1與細胞周期調(diào)控[J]. 盧夢玲,閆超,賴多,徐漢虹.  生物技術通報. 2011(10)
[3]木脂素對MGC-803胃癌細胞的抗增殖作用及其與細胞周期相關蛋白的相關性[J]. 尹美玉,崔銀姬,徐麗,崔雪花,李柱虎.  延邊大學醫(yī)學學報. 2011(03)
[4]細胞周期蛋白G2與腫瘤[J]. 茅銳,王振華.  國際病理科學與臨床雜志. 2011(03)
[5]細胞周期與帕金森病[J]. 黃杰,王濤.  中國臨床神經(jīng)科學. 2011(03)
[6]不同濃度紫杉醇誘導犬乳腺腫瘤細胞凋亡的形態(tài)學觀察[J]. 李華濤,張蓉蓉,任曉麗,陳萌,李響,劉云,馮新暢,唐大木.  中國獸醫(yī)科學. 2011(04)
[7]AO/EB雙重染色法檢測紫杉醇體外誘導犬乳腺腫瘤細胞凋亡[J]. 陳萌,李華濤,李響,張蓉蓉,任曉麗,劉云,新暢,唐大木.  廣東畜牧獸醫(yī)科技. 2011(01)
[8]紫杉醇對肝癌SMMC7721細胞凋亡的誘導作用及對相關基因表達的影響[J]. 李娟,單長民.  中國藥師. 2011(02)
[9]周期節(jié)律與腫瘤關系的分子機理[J]. 敖翔,李淑晶,伍會健.  中國生物化學與分子生物學報. 2010(11)
[10]曲古抑菌素A對結腸癌細胞細胞周期影響的機制研究[J]. 雷振東,趙華,雷三林,劉奎杰.  中南藥學. 2010(11)

碩士論文
[1]紫杉醇抑制犬乳腺腫瘤細胞增殖及相關細胞因子變化的研究[D]. 張榮蓉.東北農(nóng)業(yè)大學 2009
[2]紫杉醇致體外培養(yǎng)犬乳腺腫瘤細胞凋亡形態(tài)學及抗氧化功能影響的研究[D]. 任曉麗.東北農(nóng)業(yè)大學 2009
[3]HMME-PDT致犬乳腺腫瘤細胞凋亡相關因子的研究[D]. 馬興乾.東北農(nóng)業(yè)大學 2009
[4]犬乳腺腫瘤轉(zhuǎn)移關聯(lián)因子及細胞系性狀解析[D]. 崔文.東北農(nóng)業(yè)大學 2007



本文編號：3234114