發(fā)布時(shí)間：2021-06-10 20:47

　　安徽、山東、江蘇、浙江、福建等鴨、鵝養(yǎng)殖大省,自2010年4月以來,鴨、鵝發(fā)生了一種以產(chǎn)蛋量、采食量迅速減少,拉綠色稀糞且有腦炎樣神經(jīng)癥狀的傳染病,感染率高達(dá)100%,發(fā)病率和死亡率在5%～30%之間,產(chǎn)蛋率一般從70%～90%下降至10%以內(nèi)甚至完全停產(chǎn)。2011年9月,該病再次大面積爆發(fā),臨床癥狀與2010年相似,對我國家禽養(yǎng)殖業(yè)再次造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。鴨病毒性腦炎、鴨鵝腦炎-卵巢炎綜合征或鴨傳染性產(chǎn)蛋減少綜合癥等名稱,在2011年中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會第一屆水禽疫病防控研討會上,將該病統(tǒng)一命名為鴨坦布蘇病毒病。坦布蘇病毒感染動物后可形成分泌型NS1蛋白,在出現(xiàn)臨床癥狀之前,可檢測到分泌到血清中的NS1蛋白。針對NS1蛋白的這一特性,本研究制備了抗坦布蘇病毒NS1蛋白的單克隆抗體,建立了雙抗體夾心ELISA檢測方法,用于坦布蘇病毒感染的早期診斷,可減少因疾病大面積爆發(fā)而造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。本試驗(yàn)用鵝坦布蘇病毒JS804株病毒免疫8周齡左右的BALB/c雌鼠,采用傳統(tǒng)雜交瘤技術(shù),用原核表達(dá)的純化的NS1蛋白進(jìn)行篩選,獲得5株分泌特異性抗坦布蘇病毒NS1蛋白單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株,分別命名... 

【文章來源】：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)江蘇省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：88 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
英文縮寫詞表
第一篇 文獻(xiàn)綜述
    第一章 坦布蘇病毒的研究進(jìn)展
        1 坦布蘇病毒病的概述
        2 病原學(xué)
            2.1 病毒的結(jié)構(gòu)
            2.2 病毒的生物學(xué)特性
        3 流行情況
        4 坦布蘇病毒病的診斷
            4.1 臨床診斷
            4.2 病原檢測
            4.3 血清學(xué)檢測抗體
        5 國內(nèi)疫苗的研究進(jìn)展
            5.1 滅活疫苗
            5.2 弱毒疫苗
            5.3 基因工程亞單位疫苗
            5.4 基因工程活載體疫苗
            5.5 核酸疫苗
            5.6 合成肽疫苗
        6 實(shí)驗(yàn)動物感染模型
        7 防控措施
        8 坦布蘇病毒的NS1蛋白
            8.1 NS1蛋白
            8.2 NS1蛋白的研究進(jìn)展
            8.3 展望
        參考文獻(xiàn)
第二篇 試驗(yàn)部分
    第一章 抗鵝坦布蘇病毒JS804株NS1蛋白單克隆抗體的制備及鑒定
        1 材料
            1.1 病毒
            1.2 試驗(yàn)動物
            1.3 試驗(yàn)試劑
            1.4 主要儀器設(shè)備
        2 方法
            2.1 免疫抗原的制備
            2.2 篩選用抗原NS1的大量制備和純化
            2.3 免疫動物
            2.4 單克隆抗體檢測方法
            2.5 單克隆抗體的制備
            2.6 雜交瘤細(xì)胞的克隆化
            2.7 大量制備單克隆抗體
            2.8 單克隆抗體的鑒定
        3 結(jié)果
            3.1 免疫抗原的制備和效價(jià)的測定
            3.2 篩選抗原(NS1)的制備與純化
            3.3 ELISA檢測方法的建立
            3.4 建立雜交瘤細(xì)胞株
            3.5 純化單抗腹水
            3.6 單抗的鑒定
                3.6.1 純化的單抗ELISA效價(jià)測定
                3.6.2 單抗特異性的鑒定
            3.7 間接免疫熒光(IFA)
            3.8 單抗的體外中和試驗(yàn)
            3.9 體內(nèi)中和試驗(yàn)
        4 討論
            4.1 免疫原的制備
            4.2 細(xì)胞融合
            4.3 雜交瘤細(xì)胞的篩選
            4.4 亞克隆
        參考文獻(xiàn)
    第二章 檢測鵝坦布蘇病毒雙抗體夾心ELISA方法的建立
        1 材料
        2 方法
            2.1 兔抗鵝坦布蘇病毒多抗的制備
            2.2 單抗的制備
            2.3 單抗腹水的純化
            2.4 雙抗體夾心ELISA方法的建立
            2.5 樣品陰陽性判定標(biāo)準(zhǔn)的確定
            2.6 敏感性實(shí)驗(yàn)
            2.7 特異性實(shí)驗(yàn)
            2.8 重復(fù)性試驗(yàn)
            2.9 符合率試驗(yàn)
        3 結(jié)果
            3.1 兔抗鵝坦布蘇病毒多抗血清的制備
            3.2 兔抗鵝坦布蘇病毒多抗血清的純化和蛋白含量的測定
            3.3 單抗腹水的純化
            3.4 捕獲抗體(兔多抗)和檢測抗體(4A9)最佳稀釋度的確定
            3.5 封閉時(shí)間的確定
            3.6 封閉液的選擇
            3.7 抗原反應(yīng)時(shí)間的確定
            3.8 單抗作用時(shí)間的確定
            3.9 酶標(biāo)羊抗鼠二抗作用時(shí)間的確定
            3.10 酶標(biāo)羊抗鼠二抗最佳稀釋度的確定
            3.11 底物顯色時(shí)間的確定
            3.12 陰陽性判定標(biāo)準(zhǔn)的確定
            3.13 敏感性試驗(yàn)
            3.14 特異性試驗(yàn)
            3.15 重復(fù)性試驗(yàn)
            3.16 符合率試驗(yàn)
        4 討論
        參考文獻(xiàn)
    第三章 雙抗體夾心ELISA與套式RT-PCR檢測鴨坦布蘇病毒的比較
        1 材料
            1.1 病毒
            1.2 實(shí)驗(yàn)動物
            1.3 試劑和耗材
        2 方法
            2.1 鵝坦布蘇病毒的大量制備
            2.2 動物試驗(yàn)
        3 檢測試驗(yàn)
            3.1 雙夾心ELISA方法檢測
            3.2 套式RT-PCR方法檢測
                3.2.1 套式RT-PCR方法的建立
        4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
            4.1 病毒感染不同天數(shù)檢測結(jié)果的比較
            4.2 兩種方法檢測結(jié)果的符合率
        5 討論
        參考文獻(xiàn)
全文總結(jié)
附錄：常用試劑的配制
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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[3]主要蟲媒病毒基因芯片檢測方法的建立[D]. 朱曉光.中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院 2007
[4]非結(jié)構(gòu)蛋白NS1在登革病毒感染早期診斷及分型診斷中的作用[D]. 徐華.第一軍醫(yī)大學(xué) 2006



本文編號：3223095