豬傳染性胃腸炎（Transmissible gastroenteritis,TGE）是由豬傳染性胃腸炎病毒（Transmissible gastroenteritis virus,TGEV）引起的一種以嚴(yán)重腹瀉、嘔吐和脫水為臨床癥狀的高度接觸性腸道傳染病,主要感染2周齡內(nèi)的仔豬,其致死率可達(dá)100%,是世界各養(yǎng)豬國(guó)家仔豬早期死亡和生長(zhǎng)發(fā)育遲緩的重要疫病。近年來(lái),TGE的流行進(jìn)一步加劇,給養(yǎng)豬業(yè)造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。雖然有疫苗用于預(yù)防,但由于對(duì)病毒的致病機(jī)理尚未闡明,一直沒能從根本上控制該病。豬傳染性胃腸炎病毒主要經(jīng)消化道感染小腸,在小腸上皮細(xì)胞內(nèi)大量復(fù)制,可破壞上皮細(xì)胞鈉離子轉(zhuǎn)運(yùn)功能,導(dǎo)致腸道滲透壓升高,引起腹瀉。已知膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白NHE3（Na⁺/H⁺exchanger 3）主要介導(dǎo)腸細(xì)胞Na⁺/H⁺交換,并且與腹瀉的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。生理狀態(tài)下,Na⁺-葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)體SGLT1介導(dǎo)的NHE3易位可參與調(diào)控NHE3的活性,但在TGEV感染條件下,能否通過(guò)改變NHE3的易位,進(jìn)而影響... 

【文章來(lái)源】：西南大學(xué)重慶市 211工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

小腸營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)吸收模式圖（引自Gurneyetal.2016）

研究?jī)?nèi)容TGEV 感染豬小腸上皮細(xì)胞（IPEC-J2）對(duì) NHE3 易位和活性的影響；TGEV 感染 IPEC-J2，不同時(shí)間點(diǎn)采樣，利用 pH 熒光探針 BCECF-AM 檢測(cè) N換活性；Western-blot 和 RT-qPCR 分別檢測(cè) NHE3 和 SGLT1 的總蛋白表達(dá)量變RNA 水平；通過(guò)生物素化標(biāo)記膜蛋白檢測(cè)細(xì)胞膜上 NHE3 的蛋白表達(dá)量變化。生理情況下，SGLT1 介導(dǎo)的 p38MAPK/Akt2 調(diào)控 NHE3 易位的機(jī)制研究通過(guò)構(gòu)建慢病毒干擾載體沉默 SGLT1 表達(dá)后，Western-blot 檢測(cè)信號(hào)通路中KAPK-2 和 EZRIN 關(guān)鍵蛋白的磷酸化水平，生物素化法檢測(cè)細(xì)胞膜上 NHE3 蛋量，火焰原子吸收法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)外 Na+的濃度變化；通過(guò)藥物抑制劑 Phlorizin 下圖 2-1. SGLT1 介導(dǎo) p38MAPK/AKt2 調(diào)控 NHE3 易位的信號(hào)通路模擬圖Fig 2-1. The pathway p38MAPK/AKt2 mediated by SGLT1 regulation NHE3 translocation

后檢測(cè) SGLT1 蛋白表達(dá)變化圖 3-1 溶解曲線Fig 3-1 The melt curves圖 3-2 TGEV 感染不同時(shí)間點(diǎn) SGLT1 的基因相對(duì)表達(dá)量3-2 Relative quantity of SGLT1 mRNAat different time after TGE

【參考文獻(xiàn)】：
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