[目的]A型鴨病毒肝炎給我國養(yǎng)禽業(yè)帶來了較大的威脅,深入研究該病病原及相關致病機理對于防控該病的流行具有重要意義。反向遺傳學操作系統(tǒng)是研究RNA病毒,包括A型鴨肝炎病毒（Duck Hepatitis A Virus, DHAV）分子生物學的良好技術平臺。本論文即分別構(gòu)建了DHAV的微基因組和復制子兩種反向遺傳操作系統(tǒng),并利用這一技術平臺,初步分析和研究了DHAV基因組非編碼區(qū)的生物學功能。[方法]（1）根據(jù)DHAV ZJ-V株基因組序列（GenBank No.EF382778）,通過螢火蟲熒光素酶報告基因（fLuc）替換DHAV的ORF,保留其5’UTR和3’UTR。同時,在5’UTR上游插入海腎熒光素酶報告基因（RLuc）作為內(nèi)參基因。成功構(gòu)建了含有雙報告基因的DHAV微基因組（pRluc-fLuc）。將pRluc-fLuc轉(zhuǎn)染DF-1細胞,分別用RT-PCR、Western Blot方法結(jié)合熒光素酶活性測定,評價微基因組的有效性。同時,用RNA Draw軟件分析DHAV非編碼區(qū)（Untranslated Region）的二級結(jié)構(gòu),并在此基礎上,分別構(gòu)建了缺失5’UTR、3’UTR、... 

【文章來源】：中國農(nóng)業(yè)科學院北京市

【文章頁數(shù)】：50 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

雛鴨感染DHAV后臨床病理變化

基因組基本結(jié)構(gòu)示意圖如圖所示。IRFS P1 P2 P3< >< ~ ——?二-廣.wjvw 丨 VP3 I VP1 丨 M |2B| 2C ~拆 | ^ I ^Polyprotein

的復制模式，二者之間的差別在于采用哪種引物啟動負鏈RNA的合成。第一種模式是以病毒Vpg蛋白作為復制起始的引物；第二種是以反轉(zhuǎn)發(fā)夾環(huán)作為復制起始的引物(圖4)。4


本文編號：3219960