本文關(guān)鍵詞：早期妊娠對(duì)牛外周血單核細(xì)胞表達(dá)Th1、Th2免疫因子的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：外周血單個(gè)核細(xì)胞源于骨髓中的造血干細(xì)胞,主要包括淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞,經(jīng)血液循環(huán)或淋巴循環(huán)到達(dá)組織或器官,作為一個(gè)整體參與機(jī)體的系統(tǒng)免疫。為探索妊娠早期牛外周血單個(gè)核細(xì)胞表達(dá)Th1型細(xì)胞因子和Th2型細(xì)胞因子的變化規(guī)律,本研究以12頭健康的奶牛為研究對(duì)象,采用密度梯度離心的方法得到牛外周血單個(gè)核細(xì)胞,并運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR、蛋白免疫印跡和細(xì)胞免疫化學(xué)等實(shí)驗(yàn)方法,研究了早期妊娠奶牛在外周血單個(gè)核細(xì)胞表達(dá)Th1和Th2免疫因子的變化。得到了如下結(jié)果:1、利用密度梯度離心的方法,成功從牛外周血中分離得到了單個(gè)核細(xì)胞。從分離的結(jié)果來(lái)看,細(xì)胞分層明顯,由上層到下層依次為血漿,單個(gè)核細(xì)胞,粒細(xì)胞,紅細(xì)胞。牛外周血單個(gè)核細(xì)胞為云霧狀,利用此方法較易獲取。2、利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)發(fā)現(xiàn),妊娠早期牛外周血單個(gè)核細(xì)胞中的Th1型細(xì)胞因子中的IFN-γ表達(dá)量逐漸降低,但是TNF-α和IL-2的表達(dá)量逐漸升高。然而,在妊娠30d的牛外周血單個(gè)核細(xì)胞中的Th2型細(xì)胞因子,包括IL-4,IL-5,IL-6,IL-10和IL-13表達(dá)量逐漸升高�？傊�,妊娠早期牛外周血單個(gè)核細(xì)胞中Th2細(xì)胞因子表達(dá)量增加,這對(duì)牛妊娠成功是必不可少的。3、采用蛋白免疫印跡檢測(cè)早期妊娠對(duì)牛外周血單個(gè)核細(xì)胞中的IFN-γ蛋白表達(dá)的影響,結(jié)果發(fā)現(xiàn),未妊娠牛外周血單個(gè)核細(xì)胞中IFN-γ的表達(dá)量高于妊娠期牛外周血單個(gè)核細(xì)胞�？梢园l(fā)現(xiàn),牛外周血單個(gè)核細(xì)胞IFN-γ表達(dá)量顯著降低對(duì)牛早期妊娠十分關(guān)鍵。4、經(jīng)免疫細(xì)胞化學(xué)染色證實(shí),牛外周血單個(gè)核細(xì)胞在妊娠牛18d和妊娠牛30d,IFN-γ的表達(dá)水平顯著減少,在未妊娠牛18d牛外周血單個(gè)核細(xì)胞觀察到IFN-γ在牛外周血單個(gè)核細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)免疫細(xì)胞化學(xué)染色較強(qiáng),而且單核細(xì)胞免疫細(xì)胞化學(xué)染色強(qiáng)于淋巴細(xì)胞。
【關(guān)鍵詞】：妊娠 外周血單個(gè)核細(xì)胞 細(xì)胞因子 實(shí)時(shí)熒光定量PCR 蛋白免疫印跡 免疫化學(xué)細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：河北工程大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：S823
【目錄】：

• 摘要5-6
• Abstract6-11
• 英文縮略表11-12
• 第一章 文獻(xiàn)綜述12-21
• 1.1 引言12
• 1.2 妊娠早期的胚胎識(shí)別和免疫耐受機(jī)制的研究進(jìn)展12-16
• 1.2.1 反芻動(dòng)物妊娠識(shí)別信號(hào)--IFN-tau12-13
• 1.2.2 IFN-tau的子宮外作用13
• 1.2.3 IFN-tau的抗黃體溶解機(jī)制13
• 1.2.4 孕酮在早期妊娠對(duì)機(jī)體的免疫耐受作用13-14
• 1.2.5 孕酮誘導(dǎo)阻斷因子介導(dǎo)的妊娠免疫耐受14
• 1.2.6 PIBF與細(xì)胞因子結(jié)合參與免疫調(diào)節(jié)14
• 1.2.7 PIBF通過(guò)干擾素信號(hào)通路參與子宮內(nèi)的免疫調(diào)節(jié)14-15
• 1.2.8 孕酮介導(dǎo)其它調(diào)節(jié)基因參與免疫15
• 1.2.9 胚胎免疫耐受機(jī)制的研究進(jìn)展15-16
• 1.3 早期妊娠Th細(xì)胞及其細(xì)胞因子功能的研究進(jìn)展16-18
• 1.3.1 Th1細(xì)胞因子與妊娠的研究進(jìn)展16-17
• 1.3.2 Th2細(xì)胞因子與妊娠的研究進(jìn)展17-18
• 1.4 牛妊娠引起的全身免疫調(diào)節(jié)機(jī)制18-19
• 1.5 本研究的技術(shù)路線和目的、意義19-21
• 1.5.1 本研究技術(shù)路線19
• 1.5.2 研究目的與意義19-21
• 第二章 牛外周血單個(gè)核細(xì)胞表達(dá)Th1、Th2免疫因子mRNA的分析21-32
• 2.1 試驗(yàn)材料與方法21-22
• 2.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物與分組21
• 2.1.2 主要儀器和設(shè)備21-22
• 2.1.3 主要試劑和耗材22
• 2.2 試驗(yàn)方法22
• 2.2.1 PBMCs所需主要溶液的配置22
• 2.3 樣品采集與處理22-23
• 2.3.1 PBMCs的分離方法22-23
• 2.4 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)基因相對(duì)表達(dá)水平23-26
• 2.4.1 PBMCs的分離方法23-24
• 2.4.2 總RNA的提取和RNA濃度及純度檢測(cè)24-25
• 2.4.3 cDNA的合成25
• 2.4.4 實(shí)時(shí)熒光定量PCR25-26
• 2.4.5 PCR產(chǎn)物凝膠電泳26
• 2.5 數(shù)據(jù)分析26
• 2.6 結(jié)果與分析26-29
• 2.6.1 牛外周血單個(gè)核細(xì)胞分離結(jié)果26-27
• 2.6.2 總RNA提取與PCR擴(kuò)增電泳圖27
• 2.6.3 實(shí)時(shí)熒光定量PCR目的片段擴(kuò)增產(chǎn)物鑒定27-28
• 2.6.4 實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果28-29
• 2.7 討論29-32
• 第三章 蛋白免疫印跡檢測(cè)32-39
• 3.1 試驗(yàn)材料與方法32-33
• 3.1.1 試驗(yàn)材料32
• 3.1.2 主要儀器和設(shè)備32
• 3.1.3 主要試劑和藥品32-33
• 3.2 試驗(yàn)方法與步驟33-35
• 3.2.1 主要試劑配制33-34
• 3.2.2 Trizol法提取外周血單個(gè)核細(xì)胞總蛋白34
• 3.2.3 Bradford法操作步驟34-35
• 3.2.3.1 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線34-35
• 3.2.3.2 檢測(cè)樣品蛋白含量35
• 3.3 SDS-PAGE電泳35-37
• 3.3.1 灌膠35
• 3.3.2 點(diǎn)樣35-36
• 3.3.3 電泳36
• 3.3.4 轉(zhuǎn)膜36
• 3.3.5 免疫反應(yīng)36
• 3.3.6 化學(xué)發(fā)光、顯影、定影36-37
• 3.4 結(jié)果與分析37-38
• 3.4.1 蛋白質(zhì)濃度測(cè)定結(jié)果37-38
• 3.4.2 Western blot檢測(cè)結(jié)果與分析38
• 3.5 討論38-39
• 第四章 免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)39-43
• 4.1 試驗(yàn)材料39
• 4.1.1 試驗(yàn)材料39
• 4.1.2 試驗(yàn)主要儀器和設(shè)備39
• 4.1.3 試驗(yàn)試劑和耗材39
• 4.2 試驗(yàn)方法與步驟39-41
• 4.2.1 主要試劑配制39
• 4.2.2 免疫細(xì)胞化學(xué)操作步驟39-41
• 4.3 試驗(yàn)結(jié)果與分析41-42
• 4.3.1 免疫細(xì)胞化學(xué)結(jié)果41-42
• 4.4 討論42-43
• 第五章 全文總結(jié)43-44
• 5.1 本研究的主要結(jié)論和創(chuàng)新43
• 5.2 下一步研究計(jì)劃43-44
• 致謝44-45
• 參考文獻(xiàn)45-52
• 作者簡(jiǎn)介52
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文52-53

【參考文獻(xiàn)】

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  本文關(guān)鍵詞：早期妊娠對(duì)牛外周血單核細(xì)胞表達(dá)Th1、Th2免疫因子的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號(hào)：321895