防御素是動物天然免疫中的重要組成部分,為一種抗菌肽。具有抗真菌、細菌以及抗病毒等作用。還具有殺死腫瘤細胞等生物學功能。相關(guān)研究已經(jīng)比較深入。但防御素一直沒有被廣泛使用,原因在于大規(guī)模生產(chǎn)上存在困難。本實驗通過兩種方法體外表達綿羊防御素,并經(jīng)過純化,對其抗菌作用進行研究,為防御素應用研究和產(chǎn)業(yè)化提供實驗依據(jù),結(jié)果如下:方法一:與SUMO共同融合表達方法通過PCR擴增蒙古綿羊β防御素-1（SBD-1）基因,與SUMO基因連接后,構(gòu)建獲得pET-22b-SUMO-SBD-1重組質(zhì)粒,將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入BL21（DE3）細胞表達。分別通過超聲破碎,脫鹽,親和層析,濃縮,SUMO酶切,冷凍干燥等技術(shù)處理后,獲得綿羊β-防御素-1（SBD-1）。方法二:與類彈性蛋白ELP（Elastin-Like Protein,ELP）共同融合表達方法用PCR的方法克隆得到編碼SBD-1的成熟肽全基因序列,ELP基因連接,克隆入原核表達載體pET-22b中,構(gòu)建表達載體pET-22b-ELP-SBD-1,通過相關(guān)軟件優(yōu)化密碼子,獲得優(yōu)化的ELP-SBD-1基因序列。以此序列為基礎(chǔ),合成該基因。將合成的優(yōu)化的ELP-... 

【文章來源】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學內(nèi)蒙古自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：60 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

不同模型的抗菌肽作用機制/作用機理Fig1ariousmodelsmechanism/modeofactionofantimicrobialpeptides

圖 2 β-防御素與菌體膜的相互作用Fig 2 β-defensin interaction with the cell membrane.2 抑制細胞壁的合成細胞壁是細菌的一個獨特結(jié)構(gòu)。由于真核動物細胞中沒有細胞壁結(jié)構(gòu)，所胞壁合成是抗菌肽的一個特殊特性。特別是脂質(zhì)II，它是肽聚糖合成的重被證明是一種具有吸引力的抗菌化合物靶標。如I類細菌素，Nisin、Pacidin和Lcn972[18]。.3 抑制蛋白質(zhì)，RNA和DNA合成一些AMPs可以進入細胞，而不破壞細胞膜，并靶向抑制細胞內(nèi)的蛋白質(zhì)成。一些類似于Buforin II的抗菌肽與DNA和RNA結(jié)合，可以阻止DNA和蛋成，并具有創(chuàng)傷修復、化療吸引、血管生成等多密度的特性[18]。

結(jié)構(gòu)作用沒有研究清楚，但是通過深入研究得出高濃度的人β-防御素與CCL20的高親合受體CCR6作用。對CCL20的分子結(jié)構(gòu)分析得出，其分子結(jié)構(gòu)與人的β-防御素相似程度非常高。1997年，Medzhitov等在Nature雜志報道Toll受體同源的Toll蛋白，對天然免疫和獲得性免疫直接作用，此后他這種蛋白受到了大家的重視。而后在2002年發(fā)現(xiàn)大鼠β-防御素-2與Toll蛋白有同樣可以促進單個核細胞NF- B活化的作用，促進IL-12及IFN-α炎癥介質(zhì)的分泌，促進分子CD80、CD86的表達，進而表現(xiàn)為促進單個核細胞的增殖。但是加入TLR4抗體之后已經(jīng)活化的細胞數(shù)量都有不同程度的減少，說明β-防御素和Toll有同樣的活性[27-31]。

【參考文獻】：
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