在養(yǎng)鴨業(yè)中,鴨雌雄個(gè)體間因生理、行為等特性的不同導(dǎo)致在生產(chǎn)性能、飼養(yǎng)管理與經(jīng)濟(jì)用途及價(jià)值等方面存在巨大差異。在胚胎早期進(jìn)行性別鑒定或者通過性別控制,提前預(yù)知甚至決定動(dòng)物性別,這將會(huì)為養(yǎng)鴨業(yè)帶來一次巨大的飛躍。本實(shí)驗(yàn)以鳳頭鴨胚為研究對(duì)象,通過比較與優(yōu)化鴨胚胎期全血和尿囊液直接PCR性別鑒定方法,旨在獲得一種方便、快捷、無損的早期鴨胚性別鑒定的方法。同時(shí),通過在鴨胚中注射芳香化酶抑制劑（AI）和17β-雌二醇（E2）,在性別分化關(guān)鍵時(shí)期觀察其性腺組織學(xué)和形態(tài)學(xué)變化,成功建立鴨胚性反轉(zhuǎn)模型;采用RT-qPCR方法分析AI和E2誘導(dǎo)的性反轉(zhuǎn)鴨胚中DMRT1、SOX9、AMH、P450arom、FOXL2、SF-1等6個(gè)性別決定候選基因在性腺分化發(fā)育過程中的表達(dá),探討鴨性別決定相關(guān)基因的作用機(jī)制。進(jìn)一步通過構(gòu)建SOX9和FOXL2的干擾和過表達(dá)載體,檢測(cè)性別決定關(guān)鍵基因的表達(dá)水平變化,為探明SOX9和FOXL2基因在鴨性別分化中功能提供理論依據(jù)。主要研究結(jié)果如下:1.以鴨胚全血為模板,用常規(guī)PCR反應(yīng)緩沖液和Taq DNA聚合酶直接進(jìn)行PCR擴(kuò)增,成功鑒定鴨胚性別,該方法同樣適用于雛鴨及成年鴨血... 

【文章來源】：揚(yáng)州大學(xué)江蘇省

【文章頁數(shù)】：86 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖２－１尿囊液采樣點(diǎn)??

ＤＮＡ?ｎｅｇａｔｉｖｅ?ｃｏｎｔｒｏｌ，?３?ｔｏ?８：?ｔｈｅ?ｗｈｏｌｅ?ｂｌｏｏｄ?ｄｏｓａｇｅ?ｉｓ?０．２？?０．５，?１．０，?２．０，?３．０?ｒｅｓｐｓｔｉｖｅｌｙ．?４．０?ｊｉｌ??Ｔａｑ?ＤＮＡ聚合酶用量：結(jié)果在０．１？１．５ｐｌＴａｑ?ＤＮＡ聚合酶范圍內(nèi)都能擴(kuò)增出很好的目的??條帶（圖２－３），說明只需Ｏ．ｌｐｌＴａｑＤＮＡ聚合酶就可以擴(kuò)增出符合檢測(cè)要求的目的條帶。??１２?３?４?５?６?７?８?Ｍ?ｂＰ?１?２?３?４?５?６?７?８?Ｍ??■?ｒ?－?ｌ：Ｊｌ??４〇〇?ｉ??ｍ〇?＾?二：＾??Ａ?Ｂ??圖２－３?Ｔａｑ?ＤＮＡ聚合酶用量悌度擴(kuò)增結(jié)果??Ｆｉｇｕｒｅ?２－３?Ｔａｑ?ＤＮＡ?ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ?ｇｒａｄｉｅｎｔ?ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｒｅｓｕｌｔｓ??注：①Ａ為公鴨，Ｂ為母鴨；②Ｍ：?ＤＬｌＯＯＯＤＮＡＭａｒｋｅｒ，卜２?：?１、２均為提ＤＮＡ陽性對(duì)照，??３？８?：?Ｔａｑ?ＤＮＡ?聚合酶用量梯度?０．１、０．３、０．６、０．９、１．２?和?１．５Ｗ??Ｎｏｔｅ：?？Ａ?ｉｓ?ｔｈｅ?ｍａｌｅ?ｄｕｃｋ，?Ｂ?ｉｓ?ｔｈｅ?ｆｅｍａｌｅ?ｄｕｃｋ；?？Ｍ：ＤＬ１０００?ＤＮＡ?Ｍａｒｋｅｒ，?１－２：１?ａｎｄ?２?ａｒｅ?ｎｅｇａｔｉｖｅ??ＤＮＡ?ｃｏｎｔｒｏｌ，?３－８：?Ｔａｑ?ＤＴｓＩＡ?ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ?ｇｒａｄｉｅｎｔ?ｉｓ?０．１?？?０．３，?０．６．?０．９．?１．２?ａｎｄ?１．５?［ｉ＼??反應(yīng)程序：結(jié)果在３０？４０個(gè)循環(huán)范圍內(nèi)都可擴(kuò)增出清晰可辨的目的條帶

Ａ?Ｂ??圖２－２公鴨、母鴨全血ＰＣＲ反應(yīng)體系模板含量梯度擴(kuò)增結(jié)果??Ｆｉｇｕｒｅ?２－２?Ｇｒａｄｉｅｎｔ?Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?Ｒｅｓｕｌｔｓ?ｏｆ?ＰＣＲ?Ａｓｓａｙ?ｆｏｒ?ｍａｌｅ?ａｎｄ?ｆｅｍａｌｅ?Ｄｕｃｋｓ??注：①Ａ為公鴨，Ｂ為母鴨；②Ｍ：?ＤＬｌＯＯＯＤＮＡＭａｒｋｅｒ，?１？２?：?１、２均為提ＤＮＡ陽性對(duì)照，??３？８?：全血用量分別為０．２、０．５、１．０、２．０、３．０、?４．０…??Ｎｏｔｅ：?？Ａ?ｉｓ?ｔｈｅ?ｍａｌｅ?ｄｕｃｋ，?Ｂ?ｉｓ?ｔｈｅ?ｆｅｍａｌｅ?ｄｕｃｋ；?？Ｍ：?ＤＬ１０００?ＤＮＡ?Ｍａｒｋｅｒ，?１?ｔｏ?２：?１?ａｎｄ?２?ａｒｅ?ｔｈｅ??ＤＮＡ?ｎｅｇａｔｉｖｅ?ｃｏｎｔｒｏｌ，?３?ｔｏ?８：?ｔｈｅ?ｗｈｏｌｅ?ｂｌｏｏｄ?ｄｏｓａｇｅ?ｉｓ?０．２？?０．５，?１．０，?２．０，?３．０?ｒｅｓｐｓｔｉｖｅｌｙ．?４．０?ｊｉｌ??Ｔａｑ?ＤＮＡ聚合酶用量：結(jié)果在０．１？１．５ｐｌＴａｑ?ＤＮＡ聚合酶范圍內(nèi)都能擴(kuò)增出很好的目的??條帶（圖２－３），說明只需Ｏ．ｌｐｌＴａｑＤＮＡ聚合酶就可以擴(kuò)增出符合檢測(cè)要求的目的條帶。??１２?３?４?５?６?７?８?Ｍ?ｂＰ?１?２?３?４?５?６?７?８?Ｍ??■?ｒ?－?ｌ：Ｊｌ??４〇〇?ｉ??ｍ〇?＾?二：＾??Ａ?Ｂ??圖２－３?Ｔａｑ?ＤＮＡ聚合酶用量悌度擴(kuò)增結(jié)果??Ｆｉｇｕｒｅ?２－３?Ｔａｑ?ＤＮＡ?ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ?ｇｒａｄｉｅｎｔ?ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｒｅｓｕｌｔｓ??注：①Ａ為公鴨

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
[1]SF-1是尼羅羅非魚性類固醇激素生成、性腺發(fā)育以及性別分化所必需的關(guān)鍵因子[D]. 謝慶平.西南大學(xué) 2016

碩士論文
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[2]己烯雌酚對(duì)性反轉(zhuǎn)雞性別決定相關(guān)基因及學(xué)習(xí)記憶的影響[D]. 房麗秀.蘇州大學(xué) 2009
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本文編號(hào)：3213526