發(fā)布時間：2021-06-05 23:47

　　氟苯尼考是一種人工合成的高效廣譜動物專用抗生素,常用于防治動物的各種細(xì)菌性疾病。但由于不規(guī)范使用和濫用,它在動物食品中會產(chǎn)生殘留,并因此帶來各種問題。為了保障食品安全問題,各國政府及監(jiān)測機構(gòu)均對氟苯尼考的使用和最高殘留限量（MRL）都做了規(guī)定,因此,本研究旨在應(yīng)用膠體金免疫層析原理,研制出氟苯尼考?xì)埩魴z測試紙條。1.氟苯尼考多克隆抗體的制備及其鑒定。本研究根據(jù)氟苯尼考的結(jié)構(gòu)特性,采用戊二醛法設(shè)計出氟苯尼考的人工抗原（免疫原FFA-BSA和包被原FFA-OVA）,并用免疫原免疫BALB/C雌性小鼠,獲得可用于檢測氟苯尼考的特異性多克隆抗體。結(jié)果顯示：經(jīng)過紫外掃描鑒定,成功合成了人工抗原合FFA-BSA和FFA-OVA,偶聯(lián)比分別為12：1和11：1。制備的抗體效價達(dá)1：32000以上,抑制率為50%（IC50）時的氟苯尼考濃度為369ng/mL,與其他抗生素交叉反應(yīng)小。本試驗制備的氟苯尼考多克隆抗體具有較好親和力和高特異性,有良好的應(yīng)用價值。2.氟苯尼考?xì)埩艨焖贆z測膠體金試紙條的研制。采用檸檬酸三鈉還原法制備25nm膠體金,用制備的膠體金標(biāo)記氟苯尼考的特異性抗體,用噴膜機把適量的金標(biāo)抗體... 

【文章來源】：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)江蘇省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：76 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略詞中英文對照
上篇 文獻(xiàn)綜述
    1 氟苯尼考概述
        1.1 氟苯尼考的理化性質(zhì)
        1.2 氟苯尼考的藥理特性
            1.2.1 抗菌機理
            1.2.2 抗菌活性
            1.2.3 藥代動力學(xué)研究
        1.3 氟苯尼考的應(yīng)用
        1.4 氟苯尼考的殘留及其危害
    2 氟苯尼考?xì)埩魴z測的研究進(jìn)展
        2.1 微生物檢測法
        2.2 理化分析法
            2.2.1 高效液相色譜法(HPLC)
            2.2.2 氣相色譜法(GC)
            2.2.3 色質(zhì)聯(lián)用檢測方法(LC-MS,GC-MS)
        2.3 免疫學(xué)方法
    3 膠體金免疫層析技術(shù)
        3.1 膠體金的性質(zhì)和特點
        3.2 膠體金免疫層析原理及試紙條結(jié)構(gòu)
        3.3 膠體金免疫層析技術(shù)的原理
        3.4 膠體金免疫層析試技術(shù)的應(yīng)用
        3.5 膠體金免疫層析技術(shù)的前景展望
    4 研究目的和意義
    參考文獻(xiàn)
下篇 試驗研究
    第一章 氟苯尼考多克隆抗體的制備與鑒定
        1 材料與方法
            1.1 試驗材料
            1.2 試驗方法
        2 結(jié)果與分析
            2.1 紫外掃描結(jié)果鑒定
            2.2 人工抗原結(jié)合比
            2.3 最佳包被濃度的確定
            2.4 血清效價的測定
            2.5 抗體敏感性測定
            2.6 抗體交叉反應(yīng)率的測定
        3 討論
            3.1 氟苯尼考人工抗原的制備和鑒定
            3.2 氟苯尼考多克隆抗體的制備及鑒定
        4 小結(jié)
        參考文獻(xiàn)
    第二章 氟苯尼考?xì)埩艨焖贆z測膠體金試紙條的研制
        1 材料與方法
            1.1 試驗材料
            1.2 試驗方法
        2 結(jié)果與分析
            2.1 膠體金質(zhì)量的鑒定
            2.2 抗體pH的選擇
            2.3 抗體最佳標(biāo)記量的選擇
            2.4 金標(biāo)抗體的質(zhì)量鑒定
            2.5 T線濃度的優(yōu)化
            2.6 C線濃度的優(yōu)化
            2.7 試紙條靈敏度的測定
            2.8 樣品pH值的影響
            2.9 有機溶劑的影響
            2.10 干擾試驗
            2.11 試紙條穩(wěn)定性試驗
        3 討論
            3.1 膠體金的制備
            3.2 膠體金質(zhì)量的鑒定
            3.3 金標(biāo)抗體的制備
            3.4 試紙條材料的選擇及其層析條件的優(yōu)化
        4 小結(jié)
        參考文獻(xiàn)
    第三章 膠體金免疫層析技術(shù)和液相色譜-質(zhì)譜(LC-MS)法檢測肉食品中氟苯尼考的殘留
        1 材料與方法
            1.1 試驗材料
            1.2 試驗方法
        2 結(jié)果與分析
            2.1 LC-MS法條件優(yōu)化
            2.2 LC-MS法精密度和準(zhǔn)確度
            2.3 GICA法敏感性與可行性
            2.4 GICA法敏感性與可行性
        3 討論
            3.1 LC-MS法對FF含量測定的應(yīng)用
            3.2 GICA法對FF含量測定的應(yīng)用
            3.3 LC-MS法和GICA法對FF含量測定的比較
        4 小結(jié)
        參考文獻(xiàn)
全文結(jié)論
致謝
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表論文情況


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[2]膠體金免疫層析技術(shù)在獸醫(yī)檢測中的應(yīng)用及其展望[J]. 王剛,楊旭東.  養(yǎng)殖技術(shù)顧問. 2013(08)
[3]氟苯尼考純度及其相關(guān)理化性能測定[J]. 錢坤.  中國動物保健. 2013(05)
[4]氟苯尼考的作用機理及其臨床應(yīng)用[J]. 高婷,劉曉強.  現(xiàn)代畜牧獸醫(yī). 2013(04)
[5]微生物法檢測乳粉中抗生素殘留的構(gòu)建[J]. 王超逸,馬凱,王勇軍.  浙江農(nóng)業(yè)科學(xué). 2013(03)
[6]膠體金免疫層析技術(shù)在臨床疾病診斷中的研究進(jìn)展[J]. 林一民,王云龍,胡永芳,吳立翔.  重慶醫(yī)學(xué). 2013(01)
[7]瘦肉精三合一膠體金快速檢測板的研制及在畜肉中的應(yīng)用[J]. 王森,周亞蓮,盛慧萍,桑麗雅,馬秋玲,楊光瑞,周建昌.  浙江農(nóng)業(yè)科學(xué). 2012(12)
[8]氟苯尼考研究進(jìn)展及其在豬場使用建議[J]. 李孝文,章洪皸,宋文超,周晶,朱祺,吳承書,魏子貢.  中國豬業(yè). 2012(08)
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[10]大腸桿菌O157∶H7膠體金免疫層析快速檢測法的建立[J]. 王玉金,楊書豪,劉麗,李姍姍.  河南科學(xué). 2012(07)

博士論文
[1]鏈霉素殘留免疫學(xué)快速檢測技術(shù)研究[D]. 范國英.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2007

碩士論文
[1]氟苯尼考胺IgY抗體的制備及ELISA檢測方法的建立[D]. 趙津子.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2012
[2]氯霉素膠體金試紙條的研制[D]. 陳發(fā)榮.南昌大學(xué) 2011
[3]高效液相色譜法檢測豬肉中氟苯尼考及其代謝物氟苯尼考胺的殘留[D]. 張守明.吉林大學(xué) 2010
[4]磺胺對甲氧嘧啶膠體金免疫層析快速檢測試紙條的研制[D]. 方鉦.揚州大學(xué) 2010
[5]喹乙醇單克隆抗體的制備及其免疫學(xué)快速檢測方法的建立[D]. 宋春美.河南科技大學(xué) 2009
[6]氟苯尼考、安普霉素藥物殘留的ELISA檢測方法研究[D]. 孫法良.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2009
[7]磺胺類獸藥免疫膠體金快速檢測試紙條的研制[D]. 張佳宜.天津科技大學(xué) 2009
[8]氟喹諾酮多組分殘留檢測試紙條的研制[D]. 胡珩.吉林大學(xué) 2008
[9]中藥PZH指紋圖譜及化學(xué)成分分析研究[D]. 賴延錦.福建醫(yī)科大學(xué) 2008
[10]膠體金免疫層析快速檢測氯霉素技術(shù)研究[D]. 楊小姣.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2007



本文編號：3213142