發(fā)布時(shí)間：2021-06-05 22:46

　　肝癌是人類和動(dòng)物常發(fā)的惡性腫瘤性疾病,其中肝細(xì)胞癌（HCC）在臨床上的發(fā)病率最高,約占肝癌總發(fā)病率的70%-90%。目前,對(duì)于HCC的治療主要采取姑息性手術(shù)治療、化學(xué)藥物治療等方法,雖然這些方法具有一定的治療效果,但同時(shí)具有高風(fēng)險(xiǎn)、毒副作用大、對(duì)機(jī)體損傷嚴(yán)重等弊端。因此,開發(fā)治療HCC的天然新藥物、提高藥物作用于HCC的敏感性,是當(dāng)前抗腫瘤藥物研發(fā)的重點(diǎn)。銀杏葉多糖（GBLP）是從銀杏葉中提取出來的一種活性成分,它具有調(diào)節(jié)免疫、抗腫瘤、抗氧化等多種生物學(xué)活性。有研究表明,經(jīng)硫酸化分子修飾后,許多中藥多糖的抗腫瘤活性明顯增強(qiáng)。因此,本研究采用氯磺酸-吡啶法制備了硫酸化銀杏葉多糖（SGBLP）,以肝癌HepG2細(xì)胞為試驗(yàn)?zāi)Ｐ?檢測了SGBLP對(duì)HepG2細(xì)胞細(xì)胞活性、主要凋亡蛋白和自噬蛋白及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路PI3K/AKT/mTOR的影響。主要研究結(jié)果如下:1.采用水提醇沉法從銀杏葉干粉中提取銀杏葉粗多糖,經(jīng)過脫蛋白、除色素、透析等一系列處理得到精制銀杏葉多糖,苯酚-硫酸法測得多糖含量為84.66%,考馬斯亮藍(lán)法測得蛋白含量為0.561%,然后用氯磺酸-吡啶法對(duì)GBLP進(jìn)行硫酸化分子修飾,氯化... 

【文章來源】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)山東省

【文章頁數(shù)】：63 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

總糖含量測定的標(biāo)準(zhǔn)曲線

山東農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文25圖2蛋白質(zhì)含量檢測的標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.2BSAstandardcurve3.1.4取代度采用氯化鋇-明膠法對(duì)SGBLP的硫酸基取代度進(jìn)行測定，使用分光光度計(jì)在波長360nm進(jìn)行檢測，以干燥至恒重的硫酸鉀作為標(biāo)準(zhǔn)品繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（圖3）。將待測樣品的吸光度帶入公式計(jì)算，得到SGBLP的取代度為2.7。圖3硫酸根含量標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.3Thestandardcurveofsulfatedgroup3.2SGBLP對(duì)HepG2細(xì)胞活力的影響本實(shí)驗(yàn)以不同濃度的SGBLP（0、25、50、100、200、400、600、800、1000、1200μg/mL）分別處理HepG2細(xì)胞一定時(shí)間后（24、48、72h）；MTT結(jié)果顯示，不同濃度的SGBLP處理HepG2細(xì)胞24及48h后，對(duì)HepG2細(xì)胞活力影響成劑量依賴性，即隨著用藥劑量不斷增大，細(xì)胞活力逐漸下降，當(dāng)濃度為50μg/mL時(shí)（P<0.05），細(xì)胞活力明顯下降，

山東農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文25圖2蛋白質(zhì)含量檢測的標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.2BSAstandardcurve3.1.4取代度采用氯化鋇-明膠法對(duì)SGBLP的硫酸基取代度進(jìn)行測定，使用分光光度計(jì)在波長360nm進(jìn)行檢測，以干燥至恒重的硫酸鉀作為標(biāo)準(zhǔn)品繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（圖3）。將待測樣品的吸光度帶入公式計(jì)算，得到SGBLP的取代度為2.7。圖3硫酸根含量標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.3Thestandardcurveofsulfatedgroup3.2SGBLP對(duì)HepG2細(xì)胞活力的影響本實(shí)驗(yàn)以不同濃度的SGBLP（0、25、50、100、200、400、600、800、1000、1200μg/mL）分別處理HepG2細(xì)胞一定時(shí)間后（24、48、72h）；MTT結(jié)果顯示，不同濃度的SGBLP處理HepG2細(xì)胞24及48h后，對(duì)HepG2細(xì)胞活力影響成劑量依賴性，即隨著用藥劑量不斷增大，細(xì)胞活力逐漸下降，當(dāng)濃度為50μg/mL時(shí)（P<0.05），細(xì)胞活力明顯下降，

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]EGFR突變對(duì)肺腺癌細(xì)胞自噬活性及LC3、Beclin1基因表達(dá)的影響[J]. 馬陽,王蕊,紀(jì)曉坤,吳娟,杜蕓,王珩.  河北醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2019(09)
[2]β-1,3/1,6-葡聚糖的免疫調(diào)控機(jī)理及其在畜牧生產(chǎn)中的應(yīng)用[J]. 楊泰,楊媚,鄧圣庭,陳清華.  動(dòng)物營養(yǎng)學(xué)報(bào). 2019(08)
[3]硫酸化杏鮑菇多糖的理化特性及體外生物活性研究[J]. 伯繼芳,馬琦,劉東茹,劉昱迪,佴逸凡,李梅,徐懷德.  現(xiàn)代食品科技. 2019(06)
[4]自噬與細(xì)胞穩(wěn)態(tài)調(diào)控及腫瘤的研究進(jìn)展[J]. 王文棟,周水洪.  國際耳鼻咽喉頭頸外科雜志. 2019 (01)
[5]人參多糖飲料的制備及其防輻射功效的研究[J]. 吳秀華,李皓,昌友權(quán),朱可彤.  食品工業(yè). 2017(11)
[6]香菇多糖體內(nèi)抗氧化活性研究[J]. 楊溢爍,曾德永,劉艷,張麗香,張智.  中國食物與營養(yǎng). 2016(08)
[7]銀杏葉多糖的制備及其抗氧化性[J]. 許春雨,王爽,王璐,馬志揚(yáng),鄒丁丁,葉淑紅,劉艷.  大連工業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào). 2016(04)
[8]氯磺酸-吡啶法酯化修飾海參巖藻聚糖硫酸酯的研究[J]. 王瑞芳,吳光斌,謝遠(yuǎn)紅,陳素艷,李莉莉.  內(nèi)蒙古民族大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2016(04)
[9]酶-Sevag法除酸漿果實(shí)多糖蛋白工藝的研究[J]. 徐丹鴻,王爽,林道鵬.  安徽農(nóng)業(yè)科學(xué). 2016(04)
[10]組培霍山石斛、野生霍山石斛及河南石斛多糖及乙醇溶出物動(dòng)態(tài)積累規(guī)律研究[J]. 陳乃東,陳乃富,王陶陶,顧鎮(zhèn).  天然產(chǎn)物研究與開發(fā). 2015(12)

博士論文
[1]褐藻多糖對(duì)口腔鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞侵襲活性及巨噬細(xì)胞功能的影響及機(jī)制研究[D]. 林俊達(dá).山東大學(xué) 2017
[2]黑靈芝多糖的免疫調(diào)節(jié)活性及其作用機(jī)制[D]. 余強(qiáng).南昌大學(xué) 2014
[3]黑靈芝多糖的抗腫瘤活性及其分子機(jī)制初探[D]. 張莘莘.南昌大學(xué) 2014
[4]PI3K/PTEN/AKT/Survivin信號(hào)通路和IκB/NFκB信號(hào)通路對(duì)子宮內(nèi)膜異位癥的調(diào)節(jié)及意義[D]. 張輝.山東大學(xué) 2010
[5]當(dāng)歸多糖的結(jié)構(gòu)與抗腫瘤作用及其機(jī)制研究[D]. 曹蔚.第四軍醫(yī)大學(xué) 2006

碩士論文
[1]LncRNA UCA1對(duì)細(xì)胞自噬和結(jié)腸癌細(xì)胞增殖凋亡的影響[D]. 宋鳳玲.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2017
[2]ATG基因調(diào)控酵母自噬的系統(tǒng)研究[D]. 衛(wèi)亞平.華中科技大學(xué) 2016
[3]腫瘤抑制蛋白Spred2與LC3結(jié)合促進(jìn)自噬成熟誘導(dǎo)自噬依賴性細(xì)胞死亡[D]. 劉敏.大連醫(yī)科大學(xué) 2016
[4]重組Lac Z酵母細(xì)胞構(gòu)建及對(duì)化學(xué)誘變?cè)母咄亢Y選研究[D]. 王瑞鯤.揚(yáng)州大學(xué) 2015
[5]基于硫酸化修飾的抗蛋白質(zhì)非酶糖基化活性霍山石斛多糖的構(gòu)效關(guān)系[D]. 肖婧婧.合肥工業(yè)大學(xué) 2013
[6]低分子量海帶巖藻多糖的制備及其抗腫瘤活性的研究[D]. 劉穎.安徽農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012
[7]腫瘤細(xì)胞自噬與腫瘤細(xì)胞抗藥性機(jī)理的初步研究[D]. 解艷艷.山東大學(xué) 2012
[8]黃酮類化合物對(duì)電離輻射誘導(dǎo)PC12細(xì)胞損傷的防護(hù)作用及其機(jī)制研究[D]. 喻晶.湖北中醫(yī)藥大學(xué) 2012
[9]銀杏葉多糖的分離純化和降血糖功效研究[D]. 夏秀華.江南大學(xué) 2006



本文編號(hào)：3213063