益生菌具有治療腸炎、腹瀉、改善動(dòng)物生長(zhǎng)性能、免疫調(diào)節(jié)等作用而受到廣泛關(guān)注,但是有關(guān)益生菌抗病毒作用機(jī)制研究很少。輪狀病毒（Rotavirus, RV）是引起嬰幼兒和仔豬腹瀉的重要病原體,主要感染成熟的小腸絨毛上皮細(xì)胞,嚴(yán)重威脅人類(lèi)健康和養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展。為了研究益生菌-宿主-病毒之間的相互作用關(guān)系,木試驗(yàn)采用分離的具有抗RV活性的枯草芽孢桿菌,研究其是否通過(guò)激活腸上皮細(xì)胞’TLRs表達(dá)和增加細(xì)胞因子分泌,發(fā)揮益生菌的免疫調(diào)節(jié)作用,從而啟動(dòng)抗病毒反應(yīng)。主要的研究?jī)?nèi)容和結(jié)果如下：對(duì)本實(shí)驗(yàn)室從豬的胃腸道已分離、保存的59株益生菌,運(yùn)用MTT的方法篩選其中具有抗RV活性的菌株。選擇一株抗RV活性最高的菌株,經(jīng)生化鑒定、16sRNA鑒定為枯草芽孢桿菌。由于豬小腸上皮細(xì)胞是輪狀病毒感染仔豬的主要靶細(xì)胞,所以,本試驗(yàn)選擇豬小腸上皮細(xì)胞（Porcine intestinal epithelial cells,IPEC-J2）,在體外建立RV感染腸上皮細(xì)胞模型和枯草芽孢桿菌菌體預(yù)處理腸上皮細(xì)胞的情況下感染RV,通過(guò)在不同時(shí)間點(diǎn)檢測(cè)病毒液的TCID50,研究RV在腸上皮細(xì)胞的增殖曲線和枯草芽孢桿菌菌體預(yù)處理細(xì)... 

【文章來(lái)源】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：59 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
CONTENTS
摘要
Abstract
1 前言
    1.1 益生菌的概述
        1.1.1 益生菌的概念及分類(lèi)
        1.1.2 益生菌的作用機(jī)制
        1.1.3 益生菌抗病毒的相關(guān)研究
        1.1.4 枯草芽孢桿菌的抗病毒作用
    1.2 輪狀病毒的概述
        1.2.1 RV的病原學(xué)特征
        1.2.2 RV的臨床表現(xiàn)與致病機(jī)制
        1.2.3 RV的防治現(xiàn)狀
    1.3 腸黏膜的概述
        1.3.1 腸黏膜屏障的構(gòu)成和功能
        1.3.2 腸黏膜的先天性免疫應(yīng)答
        1.3.3 益生菌調(diào)節(jié)動(dòng)物的腸黏膜免疫
    1.4 目的意義
2 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 菌種
        2.1.2 細(xì)胞和毒株
        2.1.3 主要試劑
        2.1.4 主要溶液的配置
        2.1.5 主要實(shí)驗(yàn)儀器
    2.2 方法
        2.2.1 抗RV菌株的篩選及鑒定
        2.2.2 RV生長(zhǎng)曲線的制備
        2.2.3 RT-PCR檢測(cè)IL-6、IL-8、IFN-γ、TLR2、TLR3和TLR9 mRNA表達(dá)量的變化
        2.2.4 數(shù)據(jù)處理及分析
3 結(jié)果與分析
    3.1 抗RV菌株的篩選及鑒定
        3.1.1 抗RV菌株的篩選
        3.1.2 篩選菌株的16sRNA鑒定
        3.1.3 篩選菌株的生化鑒定
    3.2 RV的生長(zhǎng)曲線
    3.3 IL-6、IL-8、IFN-γ、TLR2、TLR3和TLR9 mRNA表達(dá)量的變化
        3.3.1 目的基因片段擴(kuò)增
        3.3.2 標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)粒的構(gòu)建
        3.3.3 IL-6、IL-8、IFN-γ、TLR2、TLR3和TLR9 mRNA表達(dá)量的相對(duì)變化
4 討論
    4.1 腸道抗RV益生菌株的篩選
    4.2 RV在腸上皮細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線及枯草芽孢桿菌對(duì)其生長(zhǎng)的抑制
    4.3 IL-6、IL-8、IHN-γ、TLR2、TLR3和TLR9 mRNA表達(dá)量變化的分析
        4.3.1 IL-6、IL-8和IFN-γ mRNA表達(dá)量變化分析
        4.3.2 TLR2、TLR3和TLR9 mRNA表達(dá)量變化分析
5 結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)
附錄
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]在不同營(yíng)養(yǎng)水平日糧中添加益生菌對(duì)肉雞抗氧化功能、黏膜免疫及回腸菌群的影響[J]. 唐志剛,溫超,王恬,周巖民.  中國(guó)糧油學(xué)報(bào). 2013(01)
[2]益生菌治療小兒抗生素相關(guān)性腹瀉48例療效觀察[J]. 邱靜,劉金倉(cāng).  陜西醫(yī)學(xué)雜志. 2012(01)
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[4]添加枯草芽孢桿菌制劑對(duì)仔豬生產(chǎn)性能的影響[J]. 黃雪泉.  中國(guó)畜牧獸醫(yī). 2010(07)
[5]馬蹄香治療嬰幼兒輪狀病毒腸炎作用機(jī)制的初步探討[J]. 張佩紅,陳嘯洪,王燕,李華浚,章杭湖.  中國(guó)全科醫(yī)學(xué). 2010(06)
[6]熱滅活嗜酸乳桿菌黏附于HeLa細(xì)胞后腫瘤細(xì)胞免疫學(xué)性狀的變化[J]. 王紅艷,吳曉燕,張旭艷,邢永梅,周亞濱,賈繼輝,田永杰.  中國(guó)病理生理雜志. 2008(08)
[7]雙歧桿菌對(duì)輪狀病毒感染腸上皮細(xì)胞IL-8和TNF-α分泌的影響[J]. 黃鴻眉,程茜.  第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào). 2007(22)
[8]益生菌對(duì)嬰幼兒肺炎并發(fā)腹瀉的治療作用[J]. 馬紅玲,鄭躍杰,羅宏英,鄧?yán)^巋.  中國(guó)微生態(tài)學(xué)雜志. 2005(02)
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[10]益生菌營(yíng)養(yǎng)及保健作用[J]. 李琴,張世春,曾曉燕,張鐵濤.  食品研究與開(kāi)發(fā). 2004(02)

博士論文
[1]蒼苓散對(duì)濕熱型輪狀病毒腸炎腸粘膜免疫及腸道菌群影響的研究[D]. 羅菲.廣州中醫(yī)藥大學(xué) 2012
[2]丁酸梭菌與腸道上皮細(xì)胞互作的分子機(jī)制的研究[D]. 高權(quán)新.浙江大學(xué) 2012

碩士論文
[1]豬雞腸道益生菌株的分離鑒定及其抗TGEV和IBV的作用[D]. 修晶輝.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011
[2]雞胚腸組織細(xì)胞培養(yǎng)及益生菌抗NDV作用研究[D]. 王占鋒.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2010



本文編號(hào)：3210515