為制備鼠傷寒沙門菌SseB和SseL蛋白的特異性多克隆抗體（多抗）,以鼠傷寒沙門菌S025為供體菌,PCR擴(kuò)增sseB和sseL基因,插入原核表達(dá)載體pGEX-6P-1,轉(zhuǎn)化BL21（DE3）感受態(tài)細(xì)胞進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá),獲得純化蛋白免疫小鼠制備多抗;使用λ-red同源重組方法構(gòu)建sseB和sseL基因缺失株;通過(guò)野生株和缺失株的Western-blot分析驗(yàn)證制備血清的特異性。結(jié)果顯示:成功構(gòu)建出重組質(zhì)粒pGEX-6P-1-sseB和pGEX-6P-1-sseL,轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞后,在IPTG 1 mmol/L、溫度28℃、轉(zhuǎn)速為220 r/min、誘導(dǎo)時(shí)間12 h的條件下,SseB和SseL蛋白呈可溶性表達(dá);純化蛋白免疫小鼠制備了多抗,Western-blot分析顯示該多抗可特異性檢測(cè)鼠傷寒沙門菌中的SseB和SseL蛋白。這兩種蛋白多抗的獲得為進(jìn)一步研究其功能奠定基礎(chǔ)。 

【文章來(lái)源】：中國(guó)家禽. 2020,42(06)北大核心

【文章頁(yè)數(shù)】：6 頁(yè)

【部分圖文】：

目的基因的PCR擴(kuò)增結(jié)果

重組質(zhì)粒經(jīng)Eco RⅠ和XhoⅠ雙酶切，均出現(xiàn)4 984 bp的p GEX-6P-1的載體條帶以及591 bp的sseB、954 bp的sseL的目的片段條帶（見(jiàn)圖2），分子量大小與預(yù)期相符，測(cè)序結(jié)果也與預(yù)期相符，證明重組質(zhì)粒構(gòu)建成功。2.3 目的蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)

誘導(dǎo)表達(dá)的蛋白經(jīng)SDS-PAGE，結(jié)果與未誘導(dǎo)菌相比，含GST標(biāo)簽蛋白的pGEX-6P-1-sseB、pGEX-6P-1-sseL重組菌和含空載體細(xì)菌經(jīng)過(guò)誘導(dǎo)表達(dá)后分別在約48 ku、61 ku和26 ku有特異性目的蛋白條帶（見(jiàn)圖3）。2.4 重組蛋白的可溶性分析

【參考文獻(xiàn)】：
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碩士論文
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