背景：奶牛低血鈣癥是一種以鈣代謝負平衡為主的代謝病，常發(fā)生于奶牛圍產(chǎn)期。它被分為臨床型低血鈣癥即奶牛乳熱（Milk Fever），以及亞臨床型低血鈣癥（SubclinicalHypocalcemia）。由于鈣穩(wěn)態(tài)調(diào)節(jié)機制受多種因素影響，以往單純地只針對某種病因或某種因素的單一研究，無法從整體角度了解其發(fā)病機理，因此本研究應(yīng)用相對和絕對定量的等量異位標簽（isobaric tags for relative and absolute quantitation，iTRAQ）定量蛋白組學(xué)技術(shù)篩選和鑒定奶牛低血鈣癥發(fā)生過程中有價值的潛在的差異表達蛋白，探討它們在奶牛低血鈣發(fā)生過程中的作用，這對豐富和發(fā)展該病病因?qū)W理論具有重要的意義。目的：應(yīng)用iTRAQ聯(lián)合多維液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜（LC-MS/MS）技術(shù)篩選和鑒定健康奶牛、乳熱奶牛以及亞臨床低血鈣癥奶牛之間的血漿差異表達蛋白，探究這些蛋白在低血鈣癥發(fā)生過程中所起的作用。方法：實驗動物被分為奶牛乳熱組（MF）、亞臨床低血鈣癥組（SH）和對照組（C），每組10頭奶牛。同組內(nèi)，每五個奶牛血漿（EDTA抗凝）樣品等量混合為一組，去除高豐度蛋白和經(jīng)胰酶消化為... 

【文章來源】：黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)黑龍江省

【文章頁數(shù)】：81 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

iTRAQ試劑結(jié)構(gòu)圖

基團結(jié)合后總質(zhì)荷比均為 145，因此平衡基團也有 4 種分子量，分別為 31-28 與報告基相應(yīng)；肽反應(yīng)基團的作用是把 iTRAQ 標簽與肽 N 端和每個賴氨酸側(cè)鏈連接，幾乎能將本中所有酶解后肽段全部標記，而且被標記蛋白的一些重要結(jié)構(gòu)信息不會受到影響[43]。圖 1.1 iTRAQ 試劑結(jié)構(gòu)圖Figure1.1 Structure of iTRAQ Reagents

圖 2.1 去除高豐度蛋白的 SDS-PAGE 電泳圖-dimensional electrophoresis for depletion of plasma high abunda蛋白是為了更加突出可能存在的低豐度蛋白的生物標志物，除，應(yīng)用 SDS-PAGE 對樣品進行凝膠分析，結(jié)果見圖 2.1。電泳的結(jié)果顯示去除血漿高峰度蛋白后條帶清晰銳利，沒有質(zhì)鑒定結(jié)果白在重復(fù)實驗中重疊性的分析結(jié)果roteome Discoverer 1.3 軟件矯正處理質(zhì)譜分析得到的數(shù)據(jù)，同t Daemon 2.3.02 對數(shù)據(jù)庫 NCBI-Bovine_refseq（71248 sequenc設(shè)定為 95%，且每個被鑒定的蛋白至少含有兩個肽段。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]中國奶業(yè)進入嚴冬面臨嚴峻考驗（上）——奶業(yè)發(fā)展形勢分析報告[J]. 王丁棉.  食品工業(yè)科技. 2015(03)
[2]2014年中國奶業(yè)回顧與展望[J]. 李勝利,曹志軍,劉玉滿,夏建民,王雅晶,楊敦啟,姚琨,都文,翟瑞娜,康逍桐.  中國畜牧雜志. 2015(02)
[3]奶牛生產(chǎn)癱瘓的防治[J]. 鄧祝新,劉德玉,李芳芳,王英群,李美珍,許春榮,彭夏云,吳柱月.  上海畜牧獸醫(yī)通訊. 2014(05)
[4]圍產(chǎn)期奶牛低血鈣癥的發(fā)生及預(yù)防措施研究[J]. 王寶杰,蔡蘭芬.  北京農(nóng)業(yè). 2014(24)
[5]基于iTRAQ技術(shù)的蛋白質(zhì)組學(xué)研究[J]. 桑石磊,李麗.  農(nóng)技服務(wù). 2014(06)
[6]應(yīng)用iTRAQ-HPLC-MS技術(shù)篩選奶牛脂肪肝病尿液蛋白標志物[J]. 孫雨航,夏成,舒適,孫玲偉,徐闖.  畜牧獸醫(yī)學(xué)報. 2014(05)
[7]14-3-3蛋白在心血管疾病中的作用及其分子機制研究進展[J]. 于娟,祈建勇.  廣東醫(yī)學(xué). 2014(09)
[8]α2巨球蛋白的應(yīng)用研究進展[J]. 晏鶴,張俊平,張川,胡振林.  生命的化學(xué). 2014(02)
[9]胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白-2基因研究進展[J]. 趙秀華.  中國家禽. 2014(05)
[10]我國奶牛養(yǎng)殖業(yè)成本收益分析及建議[J]. 魏秀芬,李良,張巧利.  中國奶牛. 2014(Z1)

博士論文
[1]日糧錳源和水平對產(chǎn)蛋雞蛋殼品質(zhì)的影響及其機理[D]. 肖俊峰.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2014
[2]基于iTRAQ技術(shù)的結(jié)直腸癌蛋白標志物鑒定[D]. 褚光輝.第二軍醫(yī)大學(xué) 2013

碩士論文
[1]奶牛A2M轉(zhuǎn)錄調(diào)控分子機制及其功能性分子標記篩選[D]. 王秀革.山東師范大學(xué) 2013
[2]肝臟脂蛋白酯酶LPL的代謝調(diào)節(jié)功能與機制研究[D]. 徐俊楠.第二軍醫(yī)大學(xué) 2013
[3]基于iTRAQ定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)篩選結(jié)直腸癌相關(guān)糖蛋白[D]. 張瑜.中南大學(xué) 2013
[4]奶牛乳熱血漿差異表達蛋白的分離鑒定及其生物信息學(xué)分析[D]. 舒適.黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué) 2013
[5]iTRAQ及非標定量方法分析百合綱類植物葉綠體差異蛋白[D]. 陳潔.復(fù)旦大學(xué) 2012
[6]乳熱奶牛血漿差異表達蛋白的分離與鑒定[D]. 楊龍蛟.黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué) 2010
[7]補體調(diào)節(jié)蛋白H因子及其相關(guān)蛋白的表達與膀胱移行細胞癌TUR術(shù)后復(fù)發(fā)的相關(guān)性分析[D]. 張劍.四川大學(xué) 2005



本文編號：3209897