旨在制備微小隱孢子蟲（Cryptosporidium parvum）線粒體蛋白（AOX）基因和微線體蛋白（TSP6）基因的DNA疫苗,評價其對貝氏隱孢子蟲（Cryptosporidium baileyi）感染雛雞的免疫保護(hù)性。根據(jù)GenBank庫中AOX和TSP6基因的序列設(shè)計引物,擴(kuò)增出編碼2個保護(hù)性抗原基因的DNA片段,利用DNA重組技術(shù)將2個目的片段分別克隆到真核表達(dá)載體pVAX1,制成核酸疫苗pVAX1-AOX和pVAX1-TSP6。將制備的核酸疫苗肌肉注射免疫雛雞,共分為4組,pVAX1組,pVAX1-AOX組,pVAX1-TSP6組,pVAX1-AOX+pVAX1-TSP6組,2周后檢測雛雞血清IgG抗體滴度和細(xì)胞因子（IL-4和IFN-γ）水平的變化。結(jié)果顯示,免疫組中雞的血清特異性IgG抗體水平、細(xì)胞因子IFN-γ都有明顯的升高。攻卵囊試驗結(jié)果表明,免疫組比對照組的排卵囊量明顯減少,且排卵囊時間有所縮短。表明制備的pVAX1-AOX和pVAX1-TSP6核酸疫苗有較好的免疫保護(hù)作用。 

【文章來源】：動物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2020,41(03)北大核心

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

pVAX1-AOX和 pVAX1-TSP6的雙酶切鑒定結(jié)果

雞的血清IgG抗體水平變化情況(OD450 nm)

各組雞攻C.baileyi卵囊后,每天收集糞便并檢測卵囊數(shù)。結(jié)果表明,對照組在第6天開始排出少量的卵囊,而試驗組在第7天才開始排卵囊。4組雞在感染后10 d和15 d都出現(xiàn)2個排卵囊高峰,排卵時間一直持續(xù)到25 d。從排卵囊的量上比較,pVAX1-TSP6組雞的排卵囊量顯著低于pVAX1-AOX組(P<0.05);pVAX1-AOX+pVAX1-TSP6組雞的排卵囊量與pVAX1-TSP6組無顯著變化(P>0.05);pVAX1-AOX組雞的排卵囊量相比pVAX1組也顯著減少(P<0.05)。其中pVAX1-TSP6組的免疫保護(hù)效果最好(圖5)。圖4 IL-4和IFN-γ在感染雞脾臟中的表達(dá)情況

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]微小隱孢子蟲P23基因真核表達(dá)質(zhì)粒在HeLa細(xì)胞中的表達(dá)及其免疫小鼠血清抗體效價的檢測[J]. 游艷敏,米榮升,黃燕,楊衡,賈海燕,張燁華,張曉麗,劉輝,韓先干,陳兆國.  中國獸醫(yī)科學(xué). 2018(05)
[2]陜西省部分地區(qū)雞腸道寄生蟲感染情況的調(diào)查[J]. 田格如,梁爽,王會寶,孫晶波,劉燁,楊釗,胡海旭,于三科,趙光輝.  中國獸醫(yī)科學(xué). 2015(03)
[3]我國的食源性寄生蟲病及其相關(guān)研究進(jìn)展[J]. 劉明遠(yuǎn),劉全,方維煥,尹繼剛,王學(xué)林,李建華,姜寧,張西臣,白雪,吳秀萍.  中國獸醫(yī)學(xué)報. 2014(07)
[4]隱孢子蟲鼠基因型CP15基因真核表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建及在Hela細(xì)胞中的表達(dá)[J]. 蘇慶美,何生虎,米榮升,張國恩,黃燕,周鵬,秦培蘭,呼高偉,陳兆國.  中國獸醫(yī)科學(xué). 2011(05)
[5]微小隱孢子蟲Cp16基因真核表達(dá)載體的構(gòu)建及其免疫保護(hù)性研究[J]. 肖丹,殷馳,李建華,宮鵬濤,張西臣.  西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版). 2010(12)

碩士論文
[1]雞IL-17及其相關(guān)細(xì)胞因子在貝氏隱孢子蟲感染中的動態(tài)變化[D]. 成溫玉.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2014
[2]微小隱孢子蟲部分含TSP1結(jié)構(gòu)域蛋白對上皮細(xì)胞的粘附特性研究[D]. 張靜.吉林大學(xué) 2013



本文編號：3209173