卵母細(xì)胞是雌性生殖能力的核心,卵母細(xì)胞的生長發(fā)育是一個包括核成熟和胞質(zhì)成熟相互協(xié)調(diào)的過程。紡錘體組裝和染色體排列需要精密的調(diào)控,以保證卵母細(xì)胞減數(shù)分裂的有序進(jìn)行,否則會導(dǎo)致非整倍體卵母細(xì)胞的產(chǎn)生,造成胚胎死亡或生出有缺陷的后代。因此,維持卵母細(xì)胞基因組的完整性和遺傳穩(wěn)定性具有重要的生物學(xué)意義。雖然已有各種不同的分子被發(fā)現(xiàn)與卵母細(xì)胞紡錘體、染色體缺陷有關(guān),但調(diào)節(jié)減數(shù)分裂的通路和機(jī)制仍不十分明確。Rab蛋白是一類小GTP酶,廣泛參與細(xì)胞內(nèi)各種生理活動,但其在減數(shù)分裂過程中的作用鮮有報道,為了研究Rab家族蛋白Rab5a和Rab6a在減數(shù)分裂中的功能作用及通路,本研究以小鼠卵母細(xì)胞為材料,通過嗎啉基低聚物（Phosphorodiamidate Morpholino Oligomer, PMO）和RNA干擾（RNA interference, RNAi）技術(shù),分別敲低Rab5a和Rab6a,并運(yùn)用免疫熒光染色法及激光共聚焦技術(shù)來研究Rab5a和Rab6a在卵母細(xì)胞減數(shù)分裂過程中的作用,并探討其作用機(jī)理。本研究共包括以下6個部分：試驗一、Rab5a在小鼠卵母細(xì)胞減數(shù)分裂過程中的作用本試驗旨在通過... 

【文章來源】：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)江蘇省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：141 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
符號及縮略語
前言
第一部分 文獻(xiàn)綜述
    第一章 Rab蛋白與細(xì)胞分裂
        1 細(xì)胞分裂染色體排列與分離的調(diào)控
            1.1 動粒的主要結(jié)構(gòu)與功能
            1.2 動粒-微管作用
            1.3 動粒及動粒相關(guān)蛋白
        2 Rab蛋白及其功能作用
            2.1 Rab蛋白的結(jié)構(gòu)與分布
            2.2 Rab蛋白的循環(huán)與調(diào)節(jié)
            2.3 Rab的功能
        3 Rab與細(xì)胞分裂
            3.1 Rab與胞質(zhì)分裂
            3.2 Rab與染色體分離和中板排列
    第二章 卵母細(xì)胞老化與Sirt1
        1 卵母細(xì)胞老化
            1.1 卵母細(xì)胞老化的特征及其對發(fā)育的影響
            1.2 卵母細(xì)胞老化的機(jī)理
            1.3 影響卵母細(xì)胞老化的因素
            1.4 卵母細(xì)胞老化控制機(jī)理及應(yīng)用
        2 Sirt1的結(jié)構(gòu)與功能
            2.1 Sirt1的結(jié)構(gòu)、表達(dá)與定位
            2.2 Sirt1的功能與細(xì)胞壽命
            2.3 Sirt1的抑制劑和激活劑
第二部分 試驗研究
    第三章 Rab5a在小鼠卵母細(xì)胞減數(shù)分裂過程中的作用
        1 材料
            1.1 主要儀器
            1.2 主要試劑
            1.3 試劑配制
        2 方法
            2.1 小鼠卵母細(xì)胞的采集及培養(yǎng)
            2.2 顯微注射
            2.3 小鼠卵母細(xì)胞RNA的提取及逆轉(zhuǎn)錄
            2.4 PCR
            2.5 蛋白免疫印跡(western blot)
            2.6 免疫熒光染色
            2.7 核型分析
        3 結(jié)果
            3.1 Rab5a在小鼠卵母細(xì)胞減數(shù)分裂過程中的分布變化
            3.2 Rab5a敲低效率檢測及其對卵母細(xì)胞體外成熟的影響
            3.3 Rab5a對紡錘體和染色體的影響
            3.4 Rab5a對動粒-微管作用的影響
        4 討論
        5 小結(jié)
    第四章 Rab5a影響減數(shù)分裂的信號通路探討
        1 材料
            1.1 儀器
            1.2 主要試劑
            1.3 試劑配方
        2 方法
            2.1 免疫熒光染色方法三
            2.2 Westen blot
        3 結(jié)果
            3.1 Rab5a對Lamin的影響
            3.2 Rab5a對NuMA的影響
            3.3 Rab5a對CENPF的影響
        4 討論
        5 小結(jié)
    第五章 CENPF介導(dǎo)了Rab5a在減數(shù)分裂中的作用
        1 材料
            1.1 儀器
            1.2 主要試劑
        2 方法
        3 結(jié)果
            3.1 CENPF敲低效果檢測
            3.2 CENPF對紡錘體和染色體的影響
            3.3 CENPF對動粒的影響
            3.4 CENPF和Rab5a共敲低效果檢測
        4 討論
        5 小結(jié)
    第六章 Rab6a在小鼠卵母細(xì)胞減數(shù)分裂過程中的作用
        1 材料
            1.1 主要儀器
            1.2 主要試劑
        2 方法
            2.1 去透明帶
            2.2 熒光定量PCR
        3 結(jié)果
            3.1 Rab6a在減數(shù)分裂過程中的定位
            3.2 Rab6a RNAi序列選擇及敲低效果檢測
            3.3 Rab6a對減數(shù)分裂進(jìn)程的影響
            3.4 Rab6a對紡錘體和染色體的影響
        4 討論
        5 小結(jié)
    第七章 Rab6a對卵母細(xì)胞成熟過程中細(xì)胞器的影響
        1 材料
            1.1 主要儀器
            1.2 主要試劑
            1.3 試劑配制
        2 方法
            2.1 活細(xì)胞染色法
        3 結(jié)果
            3.1 Rab6a對CG的影響
            3.2 Rab6a對Golgi的影響
            3.3 Rab6a對ER的影響
        4 討論
        5 小結(jié)
    第八章 豬卵母細(xì)胞老化的分子調(diào)控初探
        1 材料
            1.1 儀器
            1.2 試劑
            1.3 試劑配制
        2 方法
            2.1 豬卵母的采集和培養(yǎng)
            2.2 體外老化和白藜蘆醇處理
            2.3 卵母細(xì)胞收集
            2.4 豬卵免疫熒光染色
            2.5 Mito Tracker免疫熒光染色
            2.6 Western blot
        3 結(jié)果
            3.1 Sirtl在卵母細(xì)胞老化過程中的表達(dá)變化
            3.2 白藜蘆醇對卵母細(xì)胞老化過程中形態(tài)學(xué)變化的影響
            3.3 白藜蘆醇處理對體外老化的豬卵母細(xì)胞染色體和紡錘體的影響
            3.4 白藜蘆醇對體外老化的豬卵母細(xì)胞皮質(zhì)顆粒分布的影響
            3.5 白藜蘆醇對豬老化卵母細(xì)胞線粒體變化的影響
        4 討論
        5 小結(jié)
全文結(jié)論
創(chuàng)新點
參考文獻(xiàn)
附錄：攻讀博士期間論文發(fā)表情況
致謝



本文編號：3203216