為探究LRP6和VEGFR2在不同年齡牦牛肺組織中的定位和表達(dá),探討這兩種細(xì)胞因子對牦牛肺臟低氧適應(yīng)性結(jié)構(gòu)形成的可能調(diào)控作用。論文選取新生（1⁷日齡）、半歲（5⁶月齡）、成年（3⁶歲）和老年（7¹0歲）健康牦牛肺組織樣品作為研究對象,首先采用RT-PCR技術(shù)克隆牦牛LRPP6和VEGFR2基因序列,并進行相關(guān)生物信息學(xué)分析;之后運用qRT-PCR、ELISA和Western-blot實驗方法,從mRNA和蛋白兩個方面探討不同年齡牦牛肺臟中LRP6和VEGFR2的表達(dá)情況;最后采用免疫組織化學(xué)技術(shù),對LRP6和VEGFR2在不同年齡牦牛肺臟內(nèi)的準(zhǔn)確的分布位置和表達(dá)量進行研究。結(jié)果表明:1.克隆得到牦牛LRP6基因（GenBank登錄號:MF776096）,其牦牛開放閱讀框長度為624bp,起始密碼子位于41bp處,終止密碼子位于664bp處,編碼207個氨基酸。同源性分析和系統(tǒng)進化樹顯示,牦牛LRP6基因與野牦牛、北美野牛和綿羊的進化水平較為相近,與人、獼猴和食蟹猴進化水平較遠(yuǎn)。克隆得到牦牛VEGFR... 

【文章來源】：甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)甘肅省

【文章頁數(shù)】：53 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
SUMMARY
縮略詞表
引言
第一部分 文獻(xiàn)綜述
    1.肺臟的組織結(jié)結(jié)構(gòu)
    2.牦牛肺臟高原適應(yīng)性研究
    3.肺臟WNT/β-CATENIN信號通路
        3.1 WNT蛋白
        3.2 經(jīng)典WNT信號通路
        3.3 肺臟WNT/β-CATENIN信號通路的相關(guān)研究
    4.LRP6的相關(guān)研究
        4.1 LRP基因家族
        4.2 LRP6在肺臟的研究
    5.VEGFR2和相關(guān)配體的研究
        5.1 VEGF相關(guān)受體的分子特性
        5.2 VEGFR2在血管發(fā)育的機制
        5.3 VEGFR2在肺臟的分布
第二部分 實驗部分
    1.材料與方法
        1.1 組織取材與處理
            1.1.1 組織取材及保存
            1.1.2 石蠟切片制作
        1.2 實驗儀器與抗體
            1.2.1 實驗儀器及設(shè)備
            1.2.2 抗體及檢測系統(tǒng)
        1.3 ELISA檢測
            1.3.1 蛋白樣品的提取
            1.3.2 實驗步驟
        1.4 WESTERNBLOT
        1.5 總RNA提取及質(zhì)量鑒定
            1.5.1 總RNA提取
        1.6 牦牛LRP6和VEGFR2基因克隆
            1.6.1 目的片段的獲取及回收
            1.6.2 基因的克隆與測序
            1.6.3 基因的生物信息學(xué)分析
        1.7 熒光定量PCR引物設(shè)計及擴增
            1.7.1 熒光定量引物設(shè)計
            1.7.2 熒光定量PCR
        1.8 免疫組織化學(xué)
        1.9 數(shù)據(jù)統(tǒng)計
    2.結(jié)果
        2.1 LRP6和VEGFR2在不同年齡牦牛肺臟中的表達(dá)情況
        2.2 牦牛LRP6和VEGFR2基因的生物信息學(xué)分析
            2.2.1 牦牛LRP6和VEGFR2基因開放閱讀框
            2.2.2 牦牛LRP6和VEGFR2基因同源性分析
        2.3 RT-PCR結(jié)果
            2.3.1 LRP6基因mRNA在不同年齡牦牛肺臟組織的表達(dá)情況
            2.3.2 VEGFR2基因mRNA在不同年齡牦牛肺臟組織的表達(dá)情況
        2.4 免疫組化結(jié)果
            2.4.1 不同年齡牦牛肺臟內(nèi)LRP6的分布
            2.4.2 不同年齡段牦牛肺臟VEGFR2的分布
    3.討論
        3.1 LRP6和VEGFR2基因的相關(guān)分析
        3.2 LRP6在不同年齡牦牛肺臟的分布
        3.3 VEGFR2在不同年齡牦牛肺臟的分布
    4.結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡介
導(dǎo)師簡介


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]牦牛胎兒肺臟發(fā)育的形態(tài)學(xué)研究[J]. 楊琨,余四九,何俊峰,崔燕.  獸類學(xué)報. 2012(04)
[2]成年牦牛支氣管動脈的組織結(jié)構(gòu)觀察[J]. 馬興斌,崔燕,何俊峰,楊波.  中國獸醫(yī)科學(xué). 2011(03)
[3]不同年齡高原牦牛肺臟的組織結(jié)構(gòu)特征[J]. 何俊峰,余四九,崔燕.  畜牧獸醫(yī)學(xué)報. 2009(05)
[4]成年牦牛肺動脈的顯微結(jié)構(gòu)觀察[J]. 靳新花,崔燕,何俊峰,楊波.  中國獸醫(yī)科學(xué). 2009(03)
[5]高原牦牛肺血管內(nèi)皮生長因子的分布[J]. 何俊峰,崔燕.  中國獸醫(yī)科學(xué). 2008(12)
[6]成年牦牛心室壁微血管的形態(tài)特征[J]. 崔燕,賀延玉,王劍.  獸類學(xué)報. 2008(03)
[7]成年牦牛心室肌微血管床的形態(tài)學(xué)特征[J]. 賀延玉,崔燕.  中國獸醫(yī)科學(xué). 2007(04)
[8]牦牛肺臟高原適應(yīng)性的結(jié)構(gòu)研究[J]. 陳秋生,馮霞,姜生成.  中國農(nóng)業(yè)科學(xué). 2006(10)
[9]不同海拔地區(qū)牦牛的肺組織形態(tài)學(xué)比較[J]. 張勤文.  中國獸醫(yī)科技. 2004(02)
[10]血管內(nèi)皮生長因子及其受體KDR在成熟期大鼠肺內(nèi)的表達(dá)[J]. 陳勁龍,冉丕鑫.  廣州醫(yī)學(xué)院學(xué)報. 2003(04)

博士論文
[1]不同年齡牦牛肺臟支氣管系的形態(tài)結(jié)構(gòu)[D]. 楊波.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué) 2010



本文編號：3199698