本文關(guān)鍵詞：4株歐亞類禽H1N1亞型豬流感病毒生物學(xué)特性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：豬是A型流感病毒(Influenza A virus,IAV)的重要中間宿主和“混合器”,不同亞型及不同來源的流感病毒可在豬體內(nèi)頻繁重組,不斷產(chǎn)生新的流行病毒株。自20世紀(jì)至今,全球發(fā)生了4次人流感大流行,每次流感大流行都與豬流感病毒(Swine influenza viruses,SIVs)密切相關(guān)。近年來,我國SIVs流行亞型眾多且易變異,其中歐亞類禽H1N1(Eurasian avian-like H1N1,EA H1N1)SIVs自1979年被報道以來,已在我國豬群中廣泛流行并建立了穩(wěn)定的遺傳譜系,而且發(fā)生了多起感染人的事件,嚴(yán)重危害人類和動物的健康。迄今為止,研究較多的是EA H1N1 SIVs在豬群中的流行情況,然而有關(guān)EA H1N1 SIVs的生物學(xué)特性鮮有報道。因此,研究EA H1N1 SIVs的生物學(xué)特性顯得格外重要。自2010年8月至2013年3月,本實驗室對全國范圍內(nèi)的SIVs進行了系統(tǒng)性地監(jiān)測,結(jié)果從全國24個省份分離并鑒定出139株EA H1N1 SIVs。為了評價EA H1N1 SIVs的致病性、受體結(jié)合特性和在哺乳動物間的傳播能力等生物學(xué)特性,本研究首先利用哺乳動物模型BALB/c小鼠,評價了3株代表性EA H1N1SIVs和一株早期分離株在BALB/c小鼠體內(nèi)的復(fù)制能力及致病性。結(jié)果顯示:4株EA H1N1 SIVs均對小鼠呈低致病力并且均可在小鼠呼吸道進行復(fù)制。隨后選取小鼠試驗中的2株EA H1N1 SIVs,通過固相結(jié)合試驗檢測其受體結(jié)合特性并分析其氨基酸位點差異。結(jié)果顯示:2株病毒均以結(jié)合SAα-2,6Gal受體為主,共有33個氨基酸位點差異。受體結(jié)合特性試驗表明這2株病毒已經(jīng)具備了在哺乳動物間發(fā)生傳播的先決條件,進而利用哺乳動物模型雪貂,評估了其在雪貂間的呼吸道飛沫傳播能力。結(jié)果表明這2株病毒均能在雪貂間發(fā)生傳播,更重要的是A/swine/Guangxi/18/2011(H1N1)(簡稱GX/18)能在雪貂間發(fā)生3傳3的高效呼吸道飛沫傳播。本研究結(jié)果對我們深入了解EA H1N1 SIVs的生物學(xué)特性具有重要的意義,同時本研究也表明EA H1N1 SIVs存在人際間傳播的可能性,能給人類健康造成嚴(yán)重威脅,為進一步研究EA H1N1 SIVs在哺乳動物間呼吸道飛沫傳播的分子機制奠定基礎(chǔ),也為EA H1N1 SIVs的監(jiān)測與防控提供了一個新的實驗依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：歐亞類禽H1N1 豬流感病毒 致病性 受體 傳播
【學(xué)位授予單位】：甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S852.65
【目錄】：

• 摘要2-3
• Summary3-5
• 縮略語表5-8
• 第一章 文獻綜述8-21
• 1.1 A型流感病毒概述8-9
• 1.2 豬流感病毒在中國的流行概況9-11
• 1.3 歐亞類禽H1N1豬流感病毒概述11-12
• 1.4 豬流感或禽流感病毒零星感染人的情況12-13
• 1.5 研究流感病毒常用實驗動物模型13-16
• 1.5.1 流感病毒感染模型 小鼠13
• 1.5.2 流感病毒傳播模型 豚鼠13-14
• 1.5.3 流感病毒傳播模型 雪貂14-15
• 1.5.4 非人靈長類動物15-16
• 1.6 影響A型流感病毒傳播的分子機制16-19
• 1.6.1 受體結(jié)合特性與A型流感病毒傳播的關(guān)系16-17
• 1.6.2 HA糖基化與A型流感病毒傳播的關(guān)系17
• 1.6.3 HA穩(wěn)定性與A型流感病毒傳播的關(guān)系17-18
• 1.6.4 NA與A型流感病毒傳播的關(guān)系18-19
• 1.6.5 PB2與A型流感病毒傳播的關(guān)系19
• 1.7 本研究的目的與意義19-21
• 第二章 EA H1N1亞型豬流感病毒對BALB/c小鼠的致病性研究21-26
• 2.1 材料與方法21-22
• 2.1.1 病毒株21
• 2.1.2 實驗動物和雞胚21
• 2.1.3 雞胚半數(shù)感染量（EID50）的測定21
• 2.1.4 病毒對BALB/c小鼠的致病性試驗21-22
• 2.1.5 BALB/c小鼠臟器中的病毒滴定22
• 2.2 結(jié)果22-24
• 2.2.1 雞胚半數(shù)感染量（EID50）的測定結(jié)果22
• 2.2.2 病毒在BALB/c小鼠體內(nèi)的復(fù)制情況22-23
• 2.2.3 BALB/c小鼠體重變化情況23-24
• 2.3 討論24-26
• 第三章 EA H1N1亞型豬流感病毒氨基酸差異和受體結(jié)合特性分析26-33
• 3.1 材料與方法26-29
• 3.1.1 病毒株及雞胚26
• 3.1.2 實驗試劑26
• 3.1.3 病毒的擴增及純化26-27
• 3.1.4 擴增病毒的序列鑒定27-28
• 3.1.5 病毒株氨基酸位點差異分析28
• 3.1.6 病毒株受體結(jié)合特性檢測方法28-29
• 3.2 結(jié)果29-31
• 3.2.1 擴增病毒的序列鑒定結(jié)果29
• 3.2.2 病毒株氨基酸位點差異結(jié)果29-30
• 3.2.3 病毒株受體結(jié)合特性檢測結(jié)果30-31
• 3.3 討論31-33
• 第四章 EA H1N1亞型豬流感病毒在哺乳動物雪貂體內(nèi)的復(fù)制和傳播能力評估33-42
• 4.1 材料與方法33-35
• 4.1.1 病毒株33
• 4.1.2 實驗動物33
• 4.1.3 實驗試劑和雞紅細胞33
• 4.1.4 雪貂間呼吸道飛沫傳播試驗33-34
• 4.1.5 病毒在雪貂體內(nèi)的復(fù)制試驗34-35
• 4.1.6 雪貂鼻洗液與臟器中病毒滴定35
• 4.1.7 雪貂血清抗體的檢測試驗35
• 4.2 結(jié)果35-39
• 4.2.1 雪貂間呼吸道飛沫傳播試驗結(jié)果35-37
• 4.2.2 雪貂體溫、體重變化及血清抗體檢測結(jié)果37-38
• 4.2.3 病毒在雪貂體內(nèi)的復(fù)制結(jié)果38-39
• 4.3 討論39-42
• 全文結(jié)論42-43
• 參考文獻43-50
• 致謝50-51
• 作者簡介51-52
• 導(dǎo)師簡介52-53

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本文編號：319959