發(fā)布時(shí)間：2021-05-19 03:40

　　重癥急性呼吸綜合征（Severe acute respiratory syndrome,SARS）是由重癥急性呼吸綜合征病毒（Severe acute respiratory syndrome coronavirus,SARS-CoV）引起的一種急性,發(fā)熱,并伴有呼吸道感染等嚴(yán)重并發(fā)癥的致死性傳染病。該病傳播速度快、死亡率高,且尚無(wú)有效的抗病毒藥物和商業(yè)化疫苗。雖然從2004年以來(lái)沒(méi)有新的SARS感染病例報(bào)道,但是該病仍然有再次流行的可能,進(jìn)而嚴(yán)重威脅民眾的健康。2019年12月我國(guó)湖北省武漢市爆發(fā)了由SARS-CoV-2引起的COVID-19疫情,研究表明該病毒是一種類SARS樣新型冠狀病毒,說(shuō)明SARS-CoV依然存在突破物種屏障并通過(guò)中間宿主傳染給人類的潛在危險(xiǎn),因此研發(fā)SARS-CoV儲(chǔ)備型疫苗對(duì)我國(guó)防控SARS具有十分重要的意義。SARS-CoV是冠狀病毒科（Coronaviridae）、β-冠狀病毒屬（β-Coronavirus）成員。刺突蛋白（Spike protein,S）是SARS-CoV的跨膜糖蛋白,主要負(fù)責(zé)與細(xì)胞受體結(jié)合、誘導(dǎo)病毒與細(xì)胞融合以及刺激機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京市

【文章頁(yè)數(shù)】：57 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
英文縮略表
第一章 緒論
    1.1 重癥急性呼吸綜合征的研究進(jìn)展
        1.1.1 重癥急性呼吸綜合征的病原學(xué)
        1.1.2 重癥急性呼吸綜合征的流行病學(xué)
        1.1.3 重癥急性呼吸綜合征的臨床表現(xiàn)
        1.1.4 重癥急性呼吸綜合征的發(fā)病機(jī)制
        1.1.5 重癥急性呼吸綜合征的診斷與防控
    1.2 重癥急性呼吸綜合征病毒的分子生物學(xué)特性
        1.2.1 SARS-Co V概述
        1.2.2 SARS-Co V S蛋白的結(jié)構(gòu)功能特點(diǎn)
    1.3 重癥急性呼吸綜合征病毒疫苗研究進(jìn)展
        1.3.1 滅活病毒疫苗
        1.3.2 減毒活疫苗
        1.3.3 DNA疫苗
        1.3.4 亞單位疫苗
        1.3.5 重組病毒載體疫苗
    1.4 水泡性口炎病毒
        1.4.1 水泡性口炎病毒概述
        1.4.2 水泡性口炎病毒的形態(tài)和基因組結(jié)構(gòu)
        1.4.3 水泡性口炎的癥狀和流行病學(xué)
        1.4.4 水泡性口炎病毒作為活病毒疫苗載體
    1.5 本研究的目的與意義
第二章 表達(dá)SARS-Co V S蛋白嵌合型重組VSV的構(gòu)建與鑒定
    2.1 材料
        2.1.1 病毒、細(xì)胞和血清
        2.1.2 質(zhì)粒
        2.1.3 主要實(shí)驗(yàn)試劑和儀器
    2.2 方法
        2.2.1 表達(dá)SARS-Co V S蛋白嵌合型重組VSV全長(zhǎng)c DNA的構(gòu)建
            2.2.1.1 引物設(shè)計(jì)與SARS-Co V S蛋白片段合成
            2.2.1.2 SARS-Co V S蛋白基因的擴(kuò)增和序列分析
            2.2.1.3 表達(dá)S蛋白的嵌合型重組VSV基因組全長(zhǎng)c DNA的構(gòu)建
            2.2.1.4 表達(dá)e GFP重組S蛋白嵌合型VSV基因組全長(zhǎng)c DNA的構(gòu)建
        2.2.2 兩種重組病毒的拯救
        2.2.3 兩種重組病毒的鑒定
            2.2.3.1 RT-PCR鑒定
            2.2.3.2 S蛋白在感染細(xì)胞中的表達(dá)
            2.2.3.3 S蛋白的激光共聚焦鑒定
            2.2.3.4 IFA研究重組病毒的入侵細(xì)胞方式
            2.2.3.5 重組病毒的形態(tài)及S蛋白在病毒顆粒表面的分布
        2.2.4 病毒的體外生長(zhǎng)動(dòng)力學(xué)曲線檢測(cè)
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 表達(dá)S蛋白嵌合型重組VSV基因組全長(zhǎng)c DNA的構(gòu)建
        2.3.2 表達(dá)e GFP重組S蛋白嵌合型VSV基因組全長(zhǎng)c DNA的構(gòu)建
        2.3.3 兩種重組病毒的拯救
        2.3.4 兩種重組病毒的鑒定
            2.3.4.1 RT-PCR
            2.3.4.2 Western blot驗(yàn)證S蛋白在感染細(xì)胞中的表達(dá)
            2.3.4.3 S蛋白的激光共聚焦
            2.3.4.4 IFA研究重組病毒的入侵細(xì)胞方式
            2.3.4.5 重組病毒的形態(tài)特征及S蛋白在病毒顆粒表面的分布
        2.3.5 病毒的體外生長(zhǎng)動(dòng)力學(xué)曲線檢測(cè)
    2.4 討論
第三章 動(dòng)物免疫試驗(yàn)
    3.1 材料
        3.1.1 病毒、細(xì)胞、質(zhì)粒和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        3.1.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑和儀器
        3.1.3 多肽的合成
    3.2 方法
        3.2.1 小鼠的免疫試驗(yàn)
            3.2.1.1 小鼠的安全性試驗(yàn)
            3.2.1.2 小鼠的免疫試驗(yàn)
            3.2.1.3 小鼠血清的中和抗體測(cè)定
            3.2.1.4 小鼠血清ELISA實(shí)驗(yàn)
        3.2.2 恒河猴免疫試驗(yàn)
            3.2.2.1 恒河猴血清的中和抗體測(cè)定
            3.2.2.2 恒河猴血清ELISA實(shí)驗(yàn)
            3.2.2.3 PBMCs的分離
            3.2.2.4 ELISPOT實(shí)驗(yàn)
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 VSVΔG-SARS對(duì)小鼠的安全性
        3.3.2 VSVΔG-SARS誘導(dǎo)小鼠中和抗體效價(jià)測(cè)定
        3.3.3 VSVΔG-SARS誘導(dǎo)小鼠血清Ig G水平測(cè)定
        3.3.4 VSVΔG-SARS誘導(dǎo)恒河猴中和抗體效價(jià)測(cè)定
        3.3.5 VSVΔG-SARS誘導(dǎo)恒河猴血清Ig G水平測(cè)定
        3.3.6 CTL細(xì)胞表位肽篩選分析
    3.4 討論
第四章 全文結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
作者簡(jiǎn)歷


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Identification of potential cross-protective epitope between a new type of coronavirus（2019-nCoV） and severe acute respiratory syndrome virus[J]. Tianyi Qiu,Tiantian Mao,Yuan Wang,Mengdi Zhou,Jingxuan Qiu,Jianwei Wang,Jianqing Xu,Zhiwei Cao.  Journal of Genetics and Genomics. 2020(02)
[2]Evolution of the novel coronavirus from the ongoing Wuhan outbreak and modeling of its spike protein for risk of human transmission[J]. Xintian Xu,Ping Chen,Jingfang Wang,Jiannan Feng,Hui Zhou,Xuan Li,Wu Zhong,Pei Hao.  Science China（Life Sciences）. 2020(03)
[3]表達(dá)增強(qiáng)綠色熒光蛋白重組水皰性口炎病毒印第安納株的構(gòu)建[J]. 溫志遠(yuǎn),葛金英,胡森,王永,步志高.  中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2007(12)
[4]水泡性口炎病毒印第安納株反基因操作系統(tǒng)的建立[J]. 溫志遠(yuǎn),葛金英,王永,胡森,郝永清,步志高.  中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2006(05)
[5]Bioinformatics analysis of SARS-Cov M protein provides information for vaccine development[J]. LIU Wanli, LU Yun and CHEN Yinghua(Laboratory of Immunology, Research Centre for Medical Science and Department of Biology, Tsinghua University; Protein Science Laboratory of MOE, Beijing 100084, China).  Progress in Natural Science. 2003(11)
[6]免疫細(xì)胞在SARS病變組織中的表達(dá)及其作用[J]. 賀莉,丁彥青,王蔚,張慶玲,張進(jìn)華,耿艦,蔡俊杰,王慧君.  第一軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào). 2003(08)
[7]93例傳染性非典型肺炎患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群變化及臨床意義[J]. 尹熾標(biāo),張復(fù)春,唐小平,陳偉烈,陳燕清,王健,賈衛(wèi)東.  中華結(jié)核和呼吸雜志. 2003(06)

碩士論文
[1]萊斯頓型埃博拉病毒GP蛋白嵌合型水泡性口炎病毒的構(gòu)建與免疫原性研究[D]. 祖述龍.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2016
[2]埃博拉和馬爾堡病毒囊膜糖蛋白嵌合型重組水泡性口炎病毒的構(gòu)建與免疫原性研究[D]. 邵鈺.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2016
[3]表達(dá)扎伊爾型埃博拉病毒囊膜糖蛋白重組水泡性口炎病毒的構(gòu)建[D]. 宋坤.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2013



本文編號(hào)：3195043