發(fā)布時間：2021-05-19 03:21

　　禽戊型肝炎病毒（Avian hepatitis E virus,aHEV）是雞大肝大脾病（Big liver and spleen,BLS）和肝破裂出血綜合征（Hepatic rupture and hemorrhage syndrome,HRHS）的主要病原,主要侵害30-72周齡的產(chǎn)蛋雞群和肉種雞群,造成腹腔積血,卵巢機能衰退,肝臟發(fā)生脂肪或淀粉樣變性,偶爾出現(xiàn)肝脾腫大的現(xiàn)象,綜合致死率約為1%。2016年以來,在我國多個雞群中發(fā)生了以肝脾腫大和破裂等為主要表現(xiàn)的肝破裂出血綜合征,在相關(guān)雞群中多次鑒定到禽HEV并從河北某蛋種雞場中鑒定到VaHEV-HB株。研究顯示,相比于其他禽HEV參考株,該毒株致病性較強且能引起雛雞發(fā)病。我國雞群中流行的高強毒力禽HEV與國外已報道的禽HEV有何差別?感染雞群誘導的免疫學反應是怎樣的?本研究通過系統(tǒng)的動物試驗研究了該毒株的致病性,通過熒光定量PCR技術(shù)和轉(zhuǎn)錄組測序從兩方面綜合評價VaHEV-HB株感染雛雞后誘發(fā)的部分先天免疫反應指標,并對全基因組進行測序分析以探究其致病性升高的分子基礎(chǔ),為了解我國當前流行的禽HEV分子變異和致病機制提供參考數(shù)據(jù)。... 

【文章來源】：山東農(nóng)業(yè)大學山東省

【文章頁數(shù)】：74 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
符號說明
中文摘要
Abstract
1 前言
    1.1 HEV概況
        1.1.1 HEV研究進展
        1.1.2 HEV的基因組結(jié)構(gòu)
        1.1.3 HEV的宿主
        1.1.4 HEV的傳播
        1.1.5 HEV感染的臨床表現(xiàn)
        1.1.6 HEV診斷方法
            1.1.6.1 分子生物學診斷方法
            1.1.6.2 免疫學診斷方法
            1.1.6.3 免疫電子顯微鏡檢測
    1.2 禽HEV研究概況
        1.2.1 禽HEV病原學
        1.2.2 禽HEV的傳播途徑
        1.2.3 禽HEV癥狀
            1.2.3.1 肝炎脾大綜合征臨床癥狀
            1.2.3.2 大肝大脾病臨床癥狀
        1.2.4 禽HEV感染病變
            1.2.4.1 肝炎脾大綜合征病變
            1.2.4.2 大肝大脾病病變
        1.2.5 診斷
        1.2.6 防治
    1.3 禽類先天免疫
    1.4 轉(zhuǎn)錄組測序技術(shù)
        1.4.1 單細胞轉(zhuǎn)錄組測序
        1.4.2 全轉(zhuǎn)錄組測序
        1.4.3 mRNA測序技術(shù)
        1.4.4 小RNA測序技術(shù)
        1.4.5 長鏈非編碼RNA測序技術(shù)
        1.4.6 環(huán)狀RNA測序技術(shù)
    1.5 本研究的目的與意義
2.材料和方法
    2.1 材料
        2.1.1 毒株的背景及來源
        2.1.2 試驗動物
        2.1.3 主要儀器與試劑
            2.1.3.1 主要儀器
            2.1.3.2 主要試劑
            2.1.3.3 試劑配制
    2.2 方法
        2.2.1 病毒的擴增與富集
        2.2.2 擴增病毒的驗證
            2.2.2.1 用于禽HEV核酸檢測引物的合成
            2.2.2.2 樣品RNA的提取
            2.2.2.3 禽HEV的 RT-PCR檢測
        2.2.3 部分先天免疫反應指標的檢測
            2.2.3.1 試驗分組
            2.2.3.2 試驗指標
            2.2.3.3 用于檢測免疫相關(guān)細胞因子的引物合成
            2.2.3.4 病料處理及RNA提取
            2.2.3.5 通過RT-qPCR檢測部分先天免疫反應相關(guān)指標
            2.2.3.6 通過轉(zhuǎn)錄組測序檢測免疫相關(guān)基因表達
        2.2.4 病毒全基因組的擴增、克隆及測序
            2.2.4.1 引物設(shè)計
            2.2.4.2 病毒RNA的 RT-PCR擴增
            2.2.4.3 RT-PCR擴增產(chǎn)物的凝膠回收純化
            2.2.4.4 凝膠回收產(chǎn)物的連接
            2.2.4.5 連接產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化
            2.2.4.6 病毒末端測序
            2.2.4.7 基因序列分析
3 結(jié)果
    3.1 病毒的擴增與驗證
    3.2 Va HEV-HB株感染對雛雞生長的抑制作用
    3.3 Va HEV-HB株感染對雛雞肝臟和脾臟的損傷情況
    3.4 Va HEV-HB株感染雛雞后部分先天免疫反應指標的檢測與分析
    3.5 轉(zhuǎn)錄組結(jié)果分析
    3.6 Va HEV-HB株基因組分析
        3.6.1 Va HEV-HB株基因組分析
        3.6.2 禽HEV ORF1和ORF3 的變異位點
        3.6.3 系統(tǒng)發(fā)育分析
        3.6.4 禽HEV與正戊肝病毒屬A種 HEV的序列分析
4 討論
    4.1 Va HEV-HB株感染SPF雞致病性
    4.2 Va HEV-HB株全基因組分析
5 結(jié)論
參考文獻
附錄
致謝
攻讀學位期間發(fā)表論文情況


【參考文獻】：
期刊論文
[1]轉(zhuǎn)錄組測序技術(shù)的研究和應用進展[J]. 崔凱,吳偉偉,刁其玉.  生物技術(shù)通報. 2019(07)
[2]雞大肝大脾病毒RT-PCR檢測方法的建立及其檢測[J]. 馬玉玲,楊德吉,陸承平.  中國病毒學. 2005(02)
[3]部分雞場雞大肝和大脾病的血清學調(diào)查[J]. 楊德吉,單松華,侯世忠,王亞菊,薄其云,徐福南.  中國獸醫(yī)科技. 1997(06)



本文編號：3195013