T-2毒素是由鐮刀菌產(chǎn)生的毒性最強(qiáng)的A族單端孢霉烯族毒素,是全球糧谷類最常見的污染性霉菌毒素。動物或人食入被該毒素污染的食物會導(dǎo)致食物中毒性白細(xì)胞缺乏癥、單端孢霉烯族中毒癥、大骨節(jié)病、人畜赤霉糧中毒癥和克山病等多種疾病。臨床上,中毒癥狀主要表現(xiàn)為拒食、腹瀉、嘔吐、貧血、免疫力下降、內(nèi)臟器官的出血、骨髓組織的壞死、母畜不孕或流產(chǎn)甚至死亡。造血系統(tǒng)是T-2毒素的主要靶器官之一,它對造血系統(tǒng)的損傷作用以及對外周血樣的毒性作用大于同類毒素。毒素進(jìn)入機(jī)體后引起造血器官損傷,導(dǎo)致骨髓組織壞死,影響多能干細(xì)胞的功能,使多種血液成分的數(shù)量比例失衡,表現(xiàn)為：骨髓和脾臟紅髓細(xì)胞損傷、骨髓發(fā)育不全、血液系統(tǒng)內(nèi)造血細(xì)胞數(shù)目顯著減少、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和容積下降、貧血以及紅細(xì)胞溶血等癥狀。正常動物體內(nèi)的紅細(xì)胞是由多能干細(xì)胞向紅系細(xì)胞分化而來的,因此,為了闡釋T-2毒素引起造血系統(tǒng)損傷的作用機(jī)理,研究T-2毒素影響造血干細(xì)胞分化的分子作用機(jī)理是非常必要的。然而,前人對多能干細(xì)胞向紅系細(xì)胞的分化進(jìn)行研究,僅得到了參與分化過程的部分基因家族和信號通路,并未對紅系分化的分子機(jī)理進(jìn)行系統(tǒng)研究,且毒素影響多能干細(xì)胞向紅系細(xì)胞分化過... 

【文章來源】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：123 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略語表
1. 前言
    1.1 立題依據(jù)
    1.2 T-2毒素造血系統(tǒng)的毒素研究進(jìn)展
    1.3 K562細(xì)胞向紅系分化的研究進(jìn)展
    1.4 篩選所得差異表達(dá)基因(蛋白)功能的研究進(jìn)展
    1.5 研究目標(biāo)和內(nèi)容
2 材料方法
    2.1 細(xì)胞株
    2.2 主要試劑
    2.3 主要儀器
    2.4 主要試劑的配制
    2.5 差異基因和差異蛋白的篩選
    2.6 細(xì)胞培養(yǎng)及凍存
    2.7 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測相關(guān)基因mRNA的表達(dá)
        2.7.1 細(xì)胞處理及實(shí)驗(yàn)分組
        2.7.2 總RNA的提取
        2.7.3 總RNA純度及完整性的檢測
        2.7.4 逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)
        2.7.5 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測目的基因mRNA表達(dá)水平
        2.7.6 熒光定量數(shù)據(jù)分析
    2.8 Western blot方法測定相關(guān)蛋白磷酸化水平
        2.8.1 細(xì)胞處理及實(shí)驗(yàn)分組
        2.8.2 總蛋白的提取
        2.8.3 蛋白濃度測定
        2.8.4 SDS-PAGE電泳
        2.8.5 Western印跡雜交
    2.9 RNA干擾技術(shù)檢測MS4A3在紅系分化中的作用
        2.9.1 細(xì)胞處理及實(shí)驗(yàn)分組
        2.9.2 RNA干擾實(shí)驗(yàn)
    2.10 細(xì)胞紅系分化檢測
        2.10.1 流式細(xì)胞儀檢測紅系分化的可行性
        2.10.2 T-2毒素及信號通路抑制劑對K562細(xì)胞向紅系細(xì)胞分化的影響
        2.10.3 MS4A3基因?qū)t系分化的影響
    2.11 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
3. 結(jié)果
    3.1 紅系分化潛在的功能基因和蛋白
    3.2 K562細(xì)胞培養(yǎng)
    3.3 引物設(shè)計(jì)及檢測
        3.3.1 引物設(shè)計(jì)
        3.3.2 RNA質(zhì)量鑒定
        3.3.3 引物可靠性檢測
    3.4 差異基因(蛋白)在T-2毒素影響K562細(xì)胞向紅系分化中的作用
        3.4.1 T-2毒素和信號通路抑制劑對K562細(xì)胞向紅系分化的影響
        3.4.2 T-2毒素影響差異基因mRNA表達(dá)水平的時(shí)效關(guān)系
        3.4.3 差異基因(蛋白)與信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路間的關(guān)系
    3.5 MS4A3在紅系分化中的作用
        3.5.1 siRNA干擾效率與劑量
        3.5.2 MS4A3與K562細(xì)胞向紅系分化的關(guān)系
        3.5.3 信號通路對MS4A3基因的調(diào)控作用
        3.5.4 MS4A3基因與其他差異表達(dá)基因(蛋白)間的關(guān)系
4. 討論
    4.1 紅系分化檢測方法的確定
    4.2 紅系分化相關(guān)的基因和蛋白的選擇
    4.3 T-2毒素抑制K562細(xì)胞分化的途徑
    4.4 MS4A3是T-2毒素調(diào)控紅系分化的關(guān)鍵基因
    4.5 紅系分化相關(guān)的潛在分子機(jī)理
5. 結(jié)論
6 文獻(xiàn)綜述：單端孢霉烯族毒素的毒性作用機(jī)理研究進(jìn)展
    6.1 引言
    6.2 單端孢霉烯族毒素的特性
        6.2.1 T-2毒素的特性
        6.2.2 雪腐鐮刀菌烯醇的特性
        6.2.3 脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(Deoxynivalenol,DON)的特性
    6.3 單端孢霉烯族毒素的毒性
        6.3.1 急性毒性
        6.3.2 血液系統(tǒng)毒性
        6.3.3 免疫系統(tǒng)毒性
        6.3.4 細(xì)胞毒性
        6.3.5 神經(jīng)毒性
        6.3.6 遺傳毒性
        6.3.7 致癌、致畸、致突變作用
    6.4 單端孢霉烯族毒素毒性作用的分子機(jī)制
        6.4.1 單端孢霉烯族毒素誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制
        6.4.2 單端孢霉烯族毒素影響細(xì)胞增殖的分子機(jī)理
        6.4.3 單端孢霉烯族毒素對mRNA翻譯的抑制作用
        6.4.4 單端孢霉烯族毒素對MAPKs信號通路的影響
    6.5 結(jié)論與展望
參考文獻(xiàn)
致謝
附錄


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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[2]T-2毒素的細(xì)胞毒性研究[D]. 王敏輝.安徽農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011
[3]Hermap基因?qū)t細(xì)胞分化發(fā)育過程中細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的作用的研究[D]. 高賽君.廣州醫(yī)學(xué)院 2010



本文編號：3190152