犬瘟熱（CD）是由犬瘟熱病毒（CDV）引起的一種高度接觸性、致死性傳染病。我國(guó)于1980年從病犬體內(nèi)首次分離到犬瘟熱病毒。目前，隨著我國(guó)養(yǎng)殖業(yè)的快速發(fā)展，犬瘟熱病已成為危害毛皮經(jīng)濟(jì)動(dòng)物最大的傳染病之一。然而近年來，其他科屬包括大熊貓、小熊貓、獼猴等多種動(dòng)物均出現(xiàn)感染犬瘟熱病毒的報(bào)道，可見犬瘟熱病毒的感染呈現(xiàn)不斷擴(kuò)大的趨勢(shì)，由于該病的高傳染性和高致死性，所以對(duì)該病的早期預(yù)防和早期診斷就顯得尤為重要。本研究從哈爾濱一水貂養(yǎng)殖場(chǎng)，采集5只疑似犬瘟熱病死貉子的肝、肺、脾、腸等臟器，利用Vero細(xì)胞成功分離一株病毒，通過免疫熒光，RT-PCR等方法鑒定為CDV，命名為CDV-HLJ（11）。通過理化特性鑒定分離毒CDV-HLJ（11）對(duì)酸、熱、乙醚等環(huán)境因素敏感，動(dòng)物回歸實(shí)驗(yàn)用分離到的CDV-HLJ（11）株第三代細(xì)胞毒對(duì)貉（狐貍）攻毒顯示對(duì)貉與狐貍均有明顯的致病性。采用RT-PCR方法對(duì)分離到病毒的H、F基因進(jìn)行擴(kuò)增并測(cè)序，并分別與GenBank上已發(fā)表的毒株序列進(jìn)行比對(duì)。結(jié)果顯示，分離株CDV-HLJ（11）的H基因序列與野毒株HeB（07）1、SD（09）3、SD（07）1同源性最高，分別... 

【文章來源】：江蘇科技大學(xué)江蘇省

【文章頁數(shù)】：65 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
目錄
Contents
第1章 緒論
    1.1 CDV 生物學(xué)特點(diǎn)
        1.1.1 病原結(jié)構(gòu)特點(diǎn)
        1.1.2 核酸組成及特點(diǎn)
        1.1.3 CDV 的分離培養(yǎng)
    1.2 流行病學(xué)特點(diǎn)
    1.3 CDV 致病機(jī)理
    1.4 病理變化
    1.5 犬瘟熱診斷
        1.5.1 病原學(xué)方法
        1.5.2 免疫學(xué)方法
        1.5.3 單克隆抗體
        1.5.4 膠體金技術(shù)
        1.5.5 分子生物學(xué)方法
    1.6 犬瘟熱基因工程疫苗研究進(jìn)展
        1.6.1 基因疫苗
        1.6.2 基因工程亞單位疫苗
    1.7 CDV 相關(guān)蛋白及基因研究進(jìn)展
        1.7.1 核衣殼(N)蛋白及其基因
        1.7.2 融合(F)蛋白及其基因
        1.7.3 附著或血凝(H)蛋白及基因
    1.8 研究目的及意義
第2章 貉源犬瘟熱病毒的分離鑒定
    2.1 材料
        2.1.1 病料
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2.1.3 細(xì)胞
        2.1.4 主要試劑和儀器
        2.1.5 常用溶液和試劑的配置及處理
    2.2 方法
        2.2.1 病毒分離
        2.2.2 理化特性鑒定
        2.2.3 RT-PCR 鑒定
        2.2.4 免疫熒光試驗(yàn)
        2.2.5 動(dòng)物回歸試驗(yàn)
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 病毒分離結(jié)果
        2.3.2 理化特性
        2.3.3 RT-PCR 檢測(cè)
        2.3.4 免疫熒光檢測(cè)
        2.3.5 動(dòng)物回歸實(shí)驗(yàn)
    2.4 討論
第3章 H、F 基因的克隆及序列分析
    3.1 材料
        3.1.1 主要試劑
        3.1.2 試劑的配置
        3.1.3 儀器
        3.1.4 克隆載體和受體菌
        3.1.5 病毒毒株
    3.2 方法
        3.2.1 引物設(shè)計(jì)
        3.2.2 病毒基因組 RNA 的提取
        3.2.3 RT-PCR
        3.2.4 凝膠電泳
        3.2.5 PCR 產(chǎn)物的回收純化
        3.2.6 目的基因與 T 載體的連接
        3.2.7 轉(zhuǎn)化
        3.2.8 H、F基因序列測(cè)定及分析
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 H 基因 RT-PCR
        3.3.2 F 基因 RT-PCR
        3.3.3 H 基因序列分析
        3.3.4 F 基因序列分析
    3.4 討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表論文
致謝



本文編號(hào)：3182971