水牛-豬異種體細胞核移植（iSCNT）是指將水牛體細胞注射到豬去核卵子中,通過激活、培養(yǎng)等步驟觀察其后續(xù)發(fā)育情況。異種體細胞核移植對于研究核-質(zhì)互作、細胞核重編程等機制提供很好的理論依據(jù),利用異種體細胞核移植還可以保護瀕臨滅絕的珍稀物種,尤其對于卵母細胞不易獲得的物種,近年來異種核移植還用來作為人類器官移植的供體,以豬卵子作為受體結(jié)合轉(zhuǎn)基因技術(shù)生產(chǎn)與人類器官相似的組織,研究人類疾病發(fā)病機理及解決方法。本實驗采用不同的融合液組分,研究鈣離子濃度對本實驗條件下豬同種核移植發(fā)育的影響；篩選最適合水牛-豬異種核移植胚胎發(fā)育的激活條件,此外,探究了培養(yǎng)滴體積與胚胎個數(shù)的比例對于其發(fā)育的效果,并堅定了水牛-豬異種核移植。本實驗的結(jié)果如下：1.不同激活電壓對水牛-豬異種核移植發(fā)育的影響：采用1.0mM的融合激活液,分別采用120v/mm,150v/mm,180v/mm的電場強度,30us、2DC的激活參數(shù)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)電場強度對胚胎發(fā)育的作用沒有統(tǒng)計學(xué)上的差異。2.不同融合激活方法對水牛-豬異種核移植發(fā)育的影響：采用電融合激活與電融合后化學(xué)激活（離子霉素+6--DMAP）的方法,這兩種方法對水牛-豬異種... 

【文章來源】：廣西大學(xué)廣西壯族自治區(qū) 211工程院校

【文章頁數(shù)】：51 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一部分 文獻綜述
    1.1 體細胞核移植簡介
    1.2. 體細胞核移植的意義及問題
        1.2.1 體細胞核移植在科學(xué)研究上的價值
        1.2.2 體細胞核移植在珍稀動物保護上的價值
        1.2.3 體細胞核移植在醫(yī)學(xué)研究上的意義
        1.2.4 體細胞核移植存在的問題
    1.3. 影響核移植效率的因素
        1.3.1. 供體細胞
        1.3.2. 卵母細胞
        1.3.3 SCNT步驟
        1.3.4 重構(gòu)胚的培養(yǎng)
        1.3.5 表觀重編程
    1.4 本研究的目的及意義
第二部分 實驗部分
    前言
    2.1 材料和方法
        2.1.1 主要儀器
        2.1.2 主要試劑及配置方法
        2.1.3 卵母細胞的成熟
        2.1.4 供體細胞準(zhǔn)備
        2.1.5 實驗設(shè)計
        2.1.6 核移植程序
        2.1.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計
    2.2 實驗結(jié)果
        2.2.1 電場強度對水牛|豬異種核移植重構(gòu)胚發(fā)育的影響
        2.2.2 融合激活方法對水牛-豬異種體細胞核移植重構(gòu)胚胎發(fā)育的影響
        2.2.3 培養(yǎng)滴體積與重構(gòu)胚個數(shù)的比例對水牛-豬異種核移植重構(gòu)胚發(fā)育的影響
        2.2.4 轉(zhuǎn)基因異種體細胞核移植重構(gòu)胚發(fā)育的鑒定
    2.3 討論
        2.3.1 電場強度對水牛|豬異種核移植重構(gòu)胚發(fā)育的影響
        2.3.2 融合激活策略對重構(gòu)胚發(fā)育的作用
        2.3.3 培養(yǎng)滴體積與重構(gòu)胚個數(shù)的比例對水牛|豬異種體細胞核移植重構(gòu)胚發(fā)育的影響
        2.3.4 水牛|豬異種核移植重構(gòu)胚的發(fā)育鑒定
    2.4 小結(jié)
總結(jié)論
參考文獻
致謝
在校期間發(fā)表論文


【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
[1]盤羊—綿羊異種核移植技術(shù)程序的優(yōu)化研究[D]. 潘曉燕.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2008
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碩士論文
[1]食蟹猴—豬異種體細胞核移植初步研究[D]. 梁明明.廣西大學(xué) 2012



本文編號：3182945