發(fā)布時間：2021-05-12 02:41

　　自體軟骨細(xì)胞是軟骨組織工程最佳種子細(xì)胞,但存在細(xì)胞外基質(zhì)合成能力的局限性。為了獲得合成細(xì)胞外基質(zhì)能力更強(qiáng)的種子細(xì)胞,構(gòu)建了pcDNA3.1（+）-SOX9哺乳動物過表達(dá)載體質(zhì)粒,脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染分離培養(yǎng)的大鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞。免疫熒光法和Western blot檢測SOX9過表達(dá)效率,實(shí)時熒光定量PCR和Western blot檢測CollagenⅡ（Ⅱ型膠原）和Aggrecan（蛋白聚糖）mRNA和蛋白的表達(dá),阿利新藍(lán)染色檢測細(xì)胞外基質(zhì)合成情況。結(jié)果表明,成功過表達(dá)軟骨細(xì)胞的SOX9基因,細(xì)胞外基質(zhì)分泌能力明顯增強(qiáng),過表達(dá)SOX9基因能夠促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)分泌,通過轉(zhuǎn)染過表達(dá)SOX9來改良軟骨種子細(xì)胞具有可行性。 

【文章來源】：動物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2020,41(12)北大核心

【文章頁數(shù)】：6 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 試劑
        1.1.2 主要儀器
    1.2 方法
        1.2.1 體外擴(kuò)增大鼠SOX9基因
        1.2.2 構(gòu)建和鑒定pUC19-SOX9克隆載體
        1.2.3 構(gòu)建和鑒定pcDNA3.1(+)-SOX9哺乳動物過表達(dá)載體
        1.2.4 大鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞的分離和培養(yǎng)
        1.2.5 體外轉(zhuǎn)染大鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞
        1.2.6 免疫熒光法檢測SOX9過表達(dá)效率
        1.2.7 實(shí)時熒光定量PCR檢測mRNA的表達(dá)
        1.2.8 Western blot檢測蛋白表達(dá)
        1.2.9 阿利新藍(lán)染色
2 結(jié)果
    2.1 目的基因SOX9擴(kuò)增結(jié)果
    2.2 克隆載體pUC19-SOX9的鑒定
    2.3 哺乳動物過表達(dá)載體pcDNA3.1(+)-SOX9的鑒定
    2.4 大鼠軟骨細(xì)胞的鑒定
    2.5 成功轉(zhuǎn)染過表達(dá)SOX9基因
    2.6 過表達(dá)SOX9上調(diào)細(xì)胞外基質(zhì)合成
3 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]非甾體類抗炎藥物對膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)患者鎮(zhèn)痛及膝關(guān)節(jié)功能的影響觀察[J]. 王沐,蔡楠楠,朱法政.  湖南師范大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2019(04)
[2]中藥對照軟骨保護(hù)劑改善膝骨關(guān)節(jié)炎功能活動的系統(tǒng)評價[J]. 詹倩,胡廣操,王敏龍,張夢嬌,沈欽榮.  浙江中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào). 2019(02)
[3]The art of building bone: emerging role of chondrocyte-to-osteoblast transdifferentiation in endochondral ossification[J]. Patrick Aghajanian,Subburaman Mohan.  Bone Research. 2018(03)



本文編號：3182575