雞馬立克氏�。∕arek’s disease,MD）是一種由雞馬立克氏病病毒（Marek’s disease virus,MDV）引起的、雞的淋巴組織增生性傳染病,該病給養(yǎng)禽業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。MD疫苗的使用很好地控制了該病,但其病原MDV呈現(xiàn)持續(xù)進(jìn)化的趨勢(shì),給該病的防控帶來(lái)困難�；蛉笔б呙缬捎趧h除了致病基因、同時(shí)最大程度保留了免疫原性,是最有發(fā)展前景的MD疫苗,這種疫苗具有良好的安全性和更高的免疫效力。由于MD疫苗不能建立免疫屏障,不能阻止野毒感染,為MDV的檢測(cè)和監(jiān)控帶來(lái)困難。對(duì)MDV流行毒株的流行病學(xué)、病原學(xué)研究和新疫苗的開(kāi)發(fā)是控制該病的主要措施。發(fā)展更好的病毒基因編輯技術(shù)和檢測(cè)、監(jiān)測(cè)方法是非常有必要的。本實(shí)驗(yàn)室分離的一株MDV野毒株BS/15株,基因分析表明其具有中國(guó)流行毒株的特有突變,同時(shí)其在體內(nèi)復(fù)制能力強(qiáng),具有更強(qiáng)的溶細(xì)胞感染能力和表現(xiàn)“晚毒力”特征。以其為親本病毒構(gòu)建基因缺失疫苗,具有成為高效MD疫苗的潛力。本研究利用CRISPR/Cas9技術(shù),以BS/15株為研究模型,對(duì)其基因組中的主要致瘤基因meq基因進(jìn)行了缺失。試驗(yàn)中,依據(jù)中國(guó)MDV分離株BS/15株的meq基... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京市

【文章頁(yè)數(shù)】：58 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
英文縮略表
第一章 引言
    1.1 雞馬立克氏病(MD)
    1.2 雞馬立克氏病病毒(MDV)及其基因組結(jié)構(gòu)
    1.3 MDV的主要功能基因
    1.4 MDV的毒力演化
    1.5 MDV的分子變異
    1.6 MDV功能基因研究
    1.7 本研究的目的意義
第二章 利用CRISPR/Cas9系統(tǒng)構(gòu)建MDV meq基因缺失株的研究
    2.1 材料
        2.1.1 病毒和SPF雞胚
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
    2.2 方法
        2.2.1 sgRNA的設(shè)計(jì)
        2.2.2 pX330質(zhì)粒酶切和膠回收
        2.2.3 pMeq-sgRNA質(zhì)粒構(gòu)建
        2.2.4 PCR檢測(cè)引物設(shè)計(jì)及分布
        2.2.5 pMeq-sgRNA初步篩選
        2.2.6 pMD-18T-GFP質(zhì)粒構(gòu)建
        2.2.7 pCAGGS-GFP質(zhì)粒構(gòu)建
        2.2.8 MDV△Meq重組毒拯救及體外生物學(xué)特性分析
        2.2.9 MDV熒光重組毒拯救
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 pX330質(zhì)粒酶切結(jié)果
        2.3.2 pMeq-sgRNA初步篩選
        2.3.3 pMD-18T-GFP質(zhì)粒構(gòu)建結(jié)果
        2.3.4 pCAGGS-GFP質(zhì)粒構(gòu)建結(jié)果
        2.3.5 MDV△Meq重組毒拯救結(jié)果
        2.3.6 MDV熒光重組毒拯救結(jié)果
    2.4 討論
第三章 區(qū)分中國(guó)MDV野毒株與meq基因缺失株方法的建立
    3.1 材料
        3.1.1 病毒、SPF雞胚和SPF雞
        3.1.2 主要試劑
        3.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
    3.2 方法
        3.2.1 區(qū)分中國(guó)MDV野毒株與rBS△Meq株熒光定量PCR方法建立
        3.2.2 區(qū)分中國(guó)MDV野毒株與rMS△Meq株熒光定量PCR方法建立
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 區(qū)分中國(guó)MDV野毒株與rBS△Meq株熒光定量PCR方法建立
        3.3.2 區(qū)分中國(guó)MDV野毒株與rMS△Meq株熒光定量PCR方法建立
    3.4 討論
第四章 全文結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
項(xiàng)目資助
作者簡(jiǎn)歷


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]雞馬立克氏病病毒在雞淋巴細(xì)胞和羽髓中的復(fù)制動(dòng)力學(xué)分析[J]. 李晶梅,劉長(zhǎng)軍,張艷萍,施維松,曲鵬,劉愛(ài)玲,閆福海.  中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2008(11)
[2]馬立克氏病病毒Rispens株B抗原基因的克隆及其重組雞痘病毒的構(gòu)建[J]. 邢力,彭大新,朱愛(ài)華,劉秀梵,張如寬.  微生物學(xué)報(bào). 1999(02)
[3]雞馬立克氏病毒Ⅰ型毒株的分離和鑒定[J]. 單松華,胡清林,孫智鋒,袁勇,龔國(guó)華.  河南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào). 1997(02)



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