Toll樣受體（Toll-like20receptors,TLRs）是固有免疫系統(tǒng)中一類重要的跨膜信號傳遞蛋白,通過識別病原微生物保守的分子相關模式啟動對病原體的識別,從而實現(xiàn)早期抗感染作用,并為獲得性免疫提供相關活化分子。Toll樣受體15（Toll-like20receptors2015,TLR15）作為禽類所特有的模式識別受體,其在禽類免疫系統(tǒng)的作用分析有助于了解該分子的抗感染作用機制,并為免疫制劑的開發(fā)提供基礎依據。本研究以東北白鵝為試驗對象,對TLR15在相關炎癥反應中的作用進行了系列分析。本研究首先采用反轉錄PCR技術克隆東北白鵝TLR15基因,并通過生物信息學軟件分析該基因的結構特征、分類地位和進化關系;同時構建東北白鵝TLR15部分序列原核表達載體,誘導重組蛋白表達,制備兔抗鵝TLR15序列多克隆抗體;其次在細菌脂多糖（LPS）誘導下建立雛鵝炎癥反應模型,應用熒光定量PCR技術,分析東北白鵝TLR15基因以及相關免疫因子在不同組織的轉錄水平;再應用免疫組織化學技術,對TLR15在不同組織的表達水平進行檢測。結果表明:1、東北白鵝TLR15基因片段長度22059820bp... 

【文章來源】：哈爾濱師范大學黑龍江省

【文章頁數(shù)】：75 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第1章 緒論
    1.1 TOLL樣受體研究進展
        1.1.1 Toll樣受體的發(fā)現(xiàn)
        1.1.2 Toll樣受體的結構
        1.1.3 Toll樣受體的種類
        1.1.4 Toll樣受體的分布
        1.1.5 Toll樣受體的信號通路
    1.2 禽類TOLL樣受體15的研究進展
        1.2.1 雞TLR15的分子生物學研究
        1.2.2 鵝TLR15的分子生物學研究
    1.3 研究目的與意義
    1.4 研究內容
第2章 東北白鵝TLR15序列克隆、原核表達及多克隆抗體的制備
    2.1 實驗材料
        2.1.1 實驗動物
        2.1.2 載體和菌株
        2.1.3 酶及主要試劑
        2.1.4 主要儀器設備
    2.2 實驗方法
        2.2.1 引物設計
        2.2.2 鵝肝臟組織總RNA的提取
        2.2.3 鵝總RNA的純化及反轉錄
        2.2.4 鵝TLR15基因的克隆
        2.2.5 鵝TLR15生物信息學分析
        2.2.6 鵝TLR15部分基因原核表達載體的構建
        2.2.7 鵝TLR15部分基因的原核表達及多克隆抗體的制備
        2.2.8 抗血清的制備及檢測
    2.3 結果
        2.3.1 鵝肝臟組織總RNA的提取及RT-PCR
        2.3.2 鵝TLR15基因的鑒定
        2.3.3 鵝TLR15基因的生物信息學特征
        2.3.4 鵝TLR15原核表達載體的鑒定
        2.3.5 鵝TLR15重組蛋白的鑒定
        2.3.6 抗血清的檢測
    2.4 討論
    2.5 結論
第3章 LPS誘導下鵝TLR15 在組織中的分布
    3.1 實驗材料
        3.1.1 實驗動物
        3.1.2 酶及主要試劑
        3.1.3 主要儀器設備
    3.2 試驗方法
        3.2.1 雛鵝炎癥模型的建立
        3.2.2 引物設計
        3.2.3 鵝不同組織總RNA的提取
        3.2.4 總RNA的純化及反轉錄
        3.2.5 鵝TLR15 及相關免疫因子的熒光定量PCR
        3.2.6 鵝TLR15的免疫組織化學檢測
    3.3 結果
        3.3.1 鵝TLR15及免疫因子分析
        3.3.2 免疫因子表達圖譜構建
        3.3.3 鵝TLR15的組織分布
    3.4 討論
    3.5 結論
結論
參考文獻
攻讀碩士期間發(fā)表的學術論文
致謝



本文編號：3178558