慶大霉素和妥布霉素都屬于氨基糖苷類抗生素,對革蘭氏陰性菌有較強的抑菌效用,但是不規(guī)范的使用會使得其殘留在動物源性食品中,并且通過食物鏈在人體內(nèi)富集。以適配體作為識別元件的氨基糖苷類抗生素殘留的檢測在食品和環(huán)境安全等諸多領域具有重要意義。本論文包含了適配體的篩選和應用兩部分內(nèi)容:首先通過九輪篩選獲得慶大霉素特異性的單鏈DNA（ssDNA）適配體,并對適配體的結構和特性進行表征;其次將已有報道的妥布霉素適配體和本論文篩選所得的慶大霉素適配體應用于抗生素殘留的檢測。首先將指數(shù)富集的配體系統(tǒng)進化技術（SELEX）與親和層析法聯(lián)用,從長度為79個nt（中間包括35個隨機核苷酸）的初始文庫出發(fā),經(jīng)過九輪的篩選,慶大霉素與文庫序列間的親和力達到最高。將最后一輪的篩選產(chǎn)物進行PCR擴增,再挑取陽性克隆子進行測序,得到34條不同的慶大霉素適配體序列。利用DNAMAN對這些適配體序列進行同源性分析,將其分為六大家族。利用Mfold軟件在線分析這些序列的二級結構及結構穩(wěn)定性,將每一家族中結構最穩(wěn)定的適配體進行解離常數(shù)（K_d）的測定。利用熒光法測得5,8,22和26號適配體的解離常數(shù)分別... 

【文章來源】：江南大學江蘇省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：51 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 緒論
    1.1 抗生素及其殘留概述
        1.1.1 抗生素的分類
        1.1.2 抗生素殘留來源與分布
        1.1.3 氨基糖苷類抗生素及其殘留概述
    1.2 抗生素殘留的檢測
    1.3 核酸適配體
        1.3.1 核酸適配體簡介
        1.3.2 核酸適配體的特點
        1.3.3 核酸適配體的篩選
        1.3.4 核酸適配體的應用
    1.4 納米技術在生物檢測中的應用
    1.5 立題意義
    1.6 主要研究內(nèi)容
第二章 材料與方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 實驗中所需要用到的引物和寡核苷酸序列
        2.1.2 主要儀器
        2.1.3 主要試劑
        2.1.4 主要緩沖液的配制
    2.2 慶大霉素核酸適配體的篩選
        2.2.1 PCR擴增體系及條件
        2.2.2 親和層析柱的制備
        2.2.3 慶大霉素核酸適配體的篩選過程
        2.2.4 篩選產(chǎn)物的克隆、測序和序列分析
        2.2.5 適配體序列解離常數(shù)(Kd)的測定
        2.2.6 慶大霉素核酸適配體的特異性實驗
        2.2.7 慶大霉素與核酸適配體的分子對接模擬
    2.3 AuNPs比色法檢測氨基糖苷類抗生素的研究
        2.3.1 AuNPs比色法檢測妥布霉素
        2.3.2 AuNPs比色法檢測慶大霉素
第三章 結果與討論
    3.1 慶大霉素核酸適配體的篩選
        3.1.1 PCR退火溫度的優(yōu)化
        3.1.2 慶大霉素核酸適配體的篩選過程
        3.1.3 慶大霉素核酸適配體篩選輪數(shù)的確定
        3.1.4 對篩選到的適配體序列的分析
        3.1.5 適配體序列解離常數(shù)的測定
        3.1.6 慶大霉核酸適配體的結合特異性驗證
        3.1.7 慶大霉素核酸適配體的結構分析
        3.1.8 小結
    3.2 AuNPs比色法檢測氨基糖苷類抗生素的研究
        3.2.1 基于適配體的AuNPs比色法檢測抗生素的原理
        3.2.2 AuNPs比色法檢測妥布霉素的研究
        3.2.3 AuNPs比色法檢測慶大霉素的研究
        3.2.4 小結
主要結論與展望
致謝
參考文獻
附錄：作者在攻讀碩士學位期間發(fā)表的論文


【參考文獻】：
期刊論文
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[2]基于配子的抗生素檢測研究進展[J]. 蔡義林,袁愛夢,蔡珺珂,李彤,李穎,齊斌,朱穎越.  食品工業(yè)科技. 2016(16)
[3]金納米粒子和聚合物復合體系分子設計與組裝過程的計算機模擬[J]. 李延春,李洋.  化學進展. 2015(07)
[4]HPLC法測定原料乳中慶大霉素殘留的研究[J]. 趙靜,劉婷,蔡柏巖,劉鵬,錢鐳.  食品研究與開發(fā). 2015(09)
[5]牛奶中慶大霉素半定量膠體金試紙條的研制[J]. 王麗哲,王麗麗,趙瑜,于重楠,唐慧林,劉敏,何艷玲.  中國飼料. 2013(20)
[6]微生物法檢測乳粉中抗生素殘留的構建[J]. 王超逸,馬凱,王勇軍.  浙江農(nóng)業(yè)科學. 2013(03)
[7]適配體電化學生物傳感器研究進展[J]. 黃海平,朱俊杰.  分析科學學報. 2011(03)
[8]牛乳中抗生素檢測方法的研究[J]. 楊旭,王力群.  畜牧獸醫(yī)科技信息. 2008(11)
[9]牛奶中抗生素殘留及其檢測技術的研究進展[J]. 李友杰,許楊,郭杰標.  食品工業(yè)科技. 2008(08)
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碩士論文
[1]納米模擬酶活性研究及其在抗生素檢測中的應用[D]. 王春帥.江南大學 2017
[2]妥布霉素特異性單鏈DNA適配體的篩選及其序列優(yōu)化和應用研究[D]. 張玉紅.江南大學 2017
[3]基于碳納米管的慶大霉素免疫分析方法研究[D]. 韋薇.江蘇大學 2016
[4]基于石墨烯的抗生素特異性適配體篩選和傳感器構建[D]. 游元丁.江南大學 2015
[5]鏈霉素特異性單鏈DNA適配體的篩選及其在檢測中的應用[D]. 王靖元.江南大學 2013



本文編號：3173966