慶大霉素和妥布霉素都屬于氨基糖苷類(lèi)抗生素,對(duì)革蘭氏陰性菌有較強(qiáng)的抑菌效用,但是不規(guī)范的使用會(huì)使得其殘留在動(dòng)物源性食品中,并且通過(guò)食物鏈在人體內(nèi)富集。以適配體作為識(shí)別元件的氨基糖苷類(lèi)抗生素殘留的檢測(cè)在食品和環(huán)境安全等諸多領(lǐng)域具有重要意義。本論文包含了適配體的篩選和應(yīng)用兩部分內(nèi)容:首先通過(guò)九輪篩選獲得慶大霉素特異性的單鏈DNA（ssDNA）適配體,并對(duì)適配體的結(jié)構(gòu)和特性進(jìn)行表征;其次將已有報(bào)道的妥布霉素適配體和本論文篩選所得的慶大霉素適配體應(yīng)用于抗生素殘留的檢測(cè)。首先將指數(shù)富集的配體系統(tǒng)進(jìn)化技術(shù)（SELEX）與親和層析法聯(lián)用,從長(zhǎng)度為79個(gè)nt（中間包括35個(gè)隨機(jī)核苷酸）的初始文庫(kù)出發(fā),經(jīng)過(guò)九輪的篩選,慶大霉素與文庫(kù)序列間的親和力達(dá)到最高。將最后一輪的篩選產(chǎn)物進(jìn)行PCR擴(kuò)增,再挑取陽(yáng)性克隆子進(jìn)行測(cè)序,得到34條不同的慶大霉素適配體序列。利用DNAMAN對(duì)這些適配體序列進(jìn)行同源性分析,將其分為六大家族。利用Mfold軟件在線分析這些序列的二級(jí)結(jié)構(gòu)及結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性,將每一家族中結(jié)構(gòu)最穩(wěn)定的適配體進(jìn)行解離常數(shù)（K_d）的測(cè)定。利用熒光法測(cè)得5,8,22和26號(hào)適配體的解離常數(shù)分別... 

【文章來(lái)源】：江南大學(xué)江蘇省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：51 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 緒論
    1.1 抗生素及其殘留概述
        1.1.1 抗生素的分類(lèi)
        1.1.2 抗生素殘留來(lái)源與分布
        1.1.3 氨基糖苷類(lèi)抗生素及其殘留概述
    1.2 抗生素殘留的檢測(cè)
    1.3 核酸適配體
        1.3.1 核酸適配體簡(jiǎn)介
        1.3.2 核酸適配體的特點(diǎn)
        1.3.3 核酸適配體的篩選
        1.3.4 核酸適配體的應(yīng)用
    1.4 納米技術(shù)在生物檢測(cè)中的應(yīng)用
    1.5 立題意義
    1.6 主要研究?jī)?nèi)容
第二章 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)中所需要用到的引物和寡核苷酸序列
        2.1.2 主要儀器
        2.1.3 主要試劑
        2.1.4 主要緩沖液的配制
    2.2 慶大霉素核酸適配體的篩選
        2.2.1 PCR擴(kuò)增體系及條件
        2.2.2 親和層析柱的制備
        2.2.3 慶大霉素核酸適配體的篩選過(guò)程
        2.2.4 篩選產(chǎn)物的克隆、測(cè)序和序列分析
        2.2.5 適配體序列解離常數(shù)(Kd)的測(cè)定
        2.2.6 慶大霉素核酸適配體的特異性實(shí)驗(yàn)
        2.2.7 慶大霉素與核酸適配體的分子對(duì)接模擬
    2.3 AuNPs比色法檢測(cè)氨基糖苷類(lèi)抗生素的研究
        2.3.1 AuNPs比色法檢測(cè)妥布霉素
        2.3.2 AuNPs比色法檢測(cè)慶大霉素
第三章 結(jié)果與討論
    3.1 慶大霉素核酸適配體的篩選
        3.1.1 PCR退火溫度的優(yōu)化
        3.1.2 慶大霉素核酸適配體的篩選過(guò)程
        3.1.3 慶大霉素核酸適配體篩選輪數(shù)的確定
        3.1.4 對(duì)篩選到的適配體序列的分析
        3.1.5 適配體序列解離常數(shù)的測(cè)定
        3.1.6 慶大霉核酸適配體的結(jié)合特異性驗(yàn)證
        3.1.7 慶大霉素核酸適配體的結(jié)構(gòu)分析
        3.1.8 小結(jié)
    3.2 AuNPs比色法檢測(cè)氨基糖苷類(lèi)抗生素的研究
        3.2.1 基于適配體的AuNPs比色法檢測(cè)抗生素的原理
        3.2.2 AuNPs比色法檢測(cè)妥布霉素的研究
        3.2.3 AuNPs比色法檢測(cè)慶大霉素的研究
        3.2.4 小結(jié)
主要結(jié)論與展望
致謝
參考文獻(xiàn)
附錄：作者在攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[3]金納米粒子和聚合物復(fù)合體系分子設(shè)計(jì)與組裝過(guò)程的計(jì)算機(jī)模擬[J]. 李延春,李洋.  化學(xué)進(jìn)展. 2015(07)
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碩士論文
[1]納米模擬酶活性研究及其在抗生素檢測(cè)中的應(yīng)用[D]. 王春帥.江南大學(xué) 2017
[2]妥布霉素特異性單鏈DNA適配體的篩選及其序列優(yōu)化和應(yīng)用研究[D]. 張玉紅.江南大學(xué) 2017
[3]基于碳納米管的慶大霉素免疫分析方法研究[D]. 韋薇.江蘇大學(xué) 2016
[4]基于石墨烯的抗生素特異性適配體篩選和傳感器構(gòu)建[D]. 游元丁.江南大學(xué) 2015
[5]鏈霉素特異性單鏈DNA適配體的篩選及其在檢測(cè)中的應(yīng)用[D]. 王靖元.江南大學(xué) 2013



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