發(fā)布時間：2021-05-07 09:20

　　為建立肉雞成肌細(xì)胞的體外分離、培養(yǎng)及鑒定體系,選取11d雞胚為材料,利用Ⅰ型膠原酶消化雞胚胸肌,差速貼壁法分離純化成肌細(xì)胞,優(yōu)化成肌細(xì)胞培養(yǎng)條件;通過細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察和成肌分化標(biāo)志基因表達(dá)情況進(jìn)行細(xì)胞鑒定,并利用含2%馬血清的培養(yǎng)基誘導(dǎo)其成肌分化。結(jié)果表明:分離獲得的細(xì)胞貼壁后呈紡錘形,39.5℃培養(yǎng)條件下細(xì)胞增殖速度顯著高于37.0℃（P<0.05）;經(jīng)實(shí)時熒光定量PCR（RT-qPCR）檢測分析,增殖期與分化期均有成肌細(xì)胞的特異性標(biāo)志基因成肌因子5（Myogenic factor 5,Myf5）與成肌分化因子1（Myogenic differentiation 1,MyoD）的表達(dá),且與增殖期相比,成肌細(xì)胞分化期肌細(xì)胞生成素（Myogenin,MyoG）與肌肉調(diào)節(jié)因子4（Muscle regulatory factor,MRF4）基因表達(dá)量顯著升高（P<0.05）;此外,細(xì)胞增殖期結(jié)蛋白（Desmin）和分化期肌球蛋白重鏈（Myosin heavy chain,MyHC）呈陽性表達(dá)。綜上,成功分離獲得了肉雞成肌細(xì)胞,并在39.5℃培養(yǎng)條件下具有更好的增殖能力,為研究肌肉發(fā)... 

【文章來源】：中國農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報. 2020,25(09)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：8 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 試驗(yàn)材料
    1.2 試驗(yàn)方法
        1.2.1 主要培養(yǎng)基配制
        1.2.2 成肌細(xì)胞的分離
        1.2.3 成肌細(xì)胞的純化培養(yǎng)
        1.2.4 成肌細(xì)胞適宜培養(yǎng)溫度的確定
        1.2.5 成肌細(xì)胞的成肌誘導(dǎo)分化
        1.2.6 成肌細(xì)胞增殖及分化階段特異性表達(dá)基因鑒定
        1.2.7 成肌細(xì)胞Desmin與成肌誘導(dǎo)分化后MyHC免疫熒光鑒定
    1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析
2 結(jié)果與分析
    2.1 成肌細(xì)胞的分離純化及形態(tài)特征
    2.2 成肌細(xì)胞在不同溫度培養(yǎng)條件下的增殖曲線
    2.3 成肌細(xì)胞增殖及分化階段特異性表達(dá)基因的相對表達(dá)量分析
    2.4 成肌細(xì)胞標(biāo)志蛋白Desmin的表達(dá)檢測
    2.5 成肌細(xì)胞的誘導(dǎo)分化后標(biāo)志蛋白MyHC的表達(dá)檢測
3 討論
    3.1 成肌細(xì)胞的分離方法
    3.2 成肌細(xì)胞的純化方法
    3.3 成肌細(xì)胞的增殖培養(yǎng)條件和成肌分化培養(yǎng)條件
    3.4 成肌細(xì)胞及其誘導(dǎo)分化
4 結(jié)論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[7]水溶性苜蓿多糖對肉仔雞T、B淋巴細(xì)胞體外增殖的影響[J]. 劉晴雪,董曉芳,佟建明,徐春燕,王俊麗,張琪.  畜牧獸醫(yī)學(xué)報. 2010(09)
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博士論文
[1]豬骨骼肌來源成肌和成脂細(xì)胞分化差異的分子機(jī)制[D]. 孫文娟.中國農(nóng)業(yè)大學(xué) 2017



本文編號：3173148