發(fā)布時間：2021-05-07 10:16

　　【目的】探究雄激素雙氫睪酮（DHT）培養(yǎng)和田羊毛囊的最優(yōu)生長濃度,并用免疫熒光標(biāo)記法檢測雄激素對毛囊細胞增殖及凋亡的影響以及利用實時熒光定量檢測和田羊角蛋白基因在雄激素作用下的表達差異。【方法】利用外科顯微解剖技術(shù)分離毛囊,分組培養(yǎng)在不同濃度的DHT培養(yǎng)液中。利用顯微鏡測微尺測量每天生長長度,SACPIC染色觀察對比毛囊結(jié)構(gòu)的變化,然后利用EdU免疫熒光染色觀察毛囊細胞的增殖情況和利用TUNEL法對比毛囊細胞凋亡情況,最后再從分子生物學(xué)水平,利用體外培養(yǎng)的不同天數(shù)的和田羊毛囊檢測角蛋白關(guān)聯(lián)蛋白Kap基因和角蛋白中間絲蛋白Kif基因表達量的差異,并利用統(tǒng)計學(xué)方法進行顯著性分析�！窘Y(jié)果】通過試驗篩選合適的和田羊毛囊培養(yǎng)的雄激素濃度在100nM。EdU細胞增殖檢測發(fā)現(xiàn)雄激素影響下可促進毛囊真皮乳頭部位的細胞增殖。TUNEL細胞凋亡檢測發(fā)現(xiàn)雄激素可延緩細胞的凋亡時間。qPCR結(jié)果顯:Kap1.1,Kif1.2,Kap2.12,Kap4.2,Kap7和Kap8表達差異在山區(qū)型和田羊中顯著性最明顯;Kap2.9,Kap6.1及Kap5.5在平原型和田羊中差異較顯著,而Kap3.2在山區(qū)型和平原型中... 

【文章來源】：塔里木大學(xué)新疆維吾爾自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：81 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
英文縮略詞表
前言
第1章 緒論
    1.1 和田羊皮膚毛囊概述
        1.1.1 和田羊皮膚及毛囊的結(jié)構(gòu)特點
        1.1.2 影響毛囊生長發(fā)育的相關(guān)細胞
    1.2 影響毛囊生長發(fā)育的相關(guān)調(diào)控因子
        1.2.1 表皮生長因子(EGF)
        1.2.2 血管內(nèi)皮細胞生長因子(VEGF)
        1.2.3 干細胞生長因子(SCF)
        1.2.4 性激素
        1.2.5 其他
    1.3 毛囊生長發(fā)育相關(guān)的信號通路
        1.3.1 經(jīng)典的Wnt/β-catenin信號通路
        1.3.2 Notch信號通路
        1.3.3 BMP信號通路
    1.4 microRNA對毛囊發(fā)育的調(diào)控
    1.5 調(diào)控毛囊生長發(fā)育的相關(guān)基因
        1.5.1 Hox基因(同源框基因)
        1.5.2 Kap基因
    1.6 試驗相關(guān)技術(shù)
        1.6.1 免疫熒光技術(shù)
        1.6.2 實時熒光定量PCR技術(shù)
    1.7 研究目的意義
第2章 雄激素對體外和田羊毛囊培養(yǎng)的生長影響
    2.1 材料與方法
        2.1.1 新疆和田羊
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 主要試驗儀器
    2.2 試驗方法
        2.2.1 配制主要試劑
        2.2.2 體外培養(yǎng)和田羊毛囊在雄激素下的生長長度分析
        2.2.3 和田羊毛囊石蠟切片的制作
    2.3 結(jié)果分析
        2.3.1 毛囊長度統(tǒng)計結(jié)果分析
        2.3.2 SACPIC染色結(jié)構(gòu)分析
    2.4 討論
    2.5 小結(jié)
第3章 雄激素作用下和田羊毛囊細胞增殖和凋亡活躍區(qū)分析
    3.1 材料和方法
        3.1.1 試驗材料
        3.1.2 主要試劑
        3.1.3 主要儀器
        3.1.4 溶液配制
        3.1.5 試驗方法
    3.2 結(jié)果與分析
        3.2.1 雄激素作用下對和田羊毛囊細胞增殖的影響
        3.2.2 在雄激素影響下的和田羊毛囊細胞凋亡趨勢
        3.2.3 Kap7多克隆抗體在和田羊毛囊細胞中的表達
    3.3 討論
    3.4 小結(jié)
第4章 和田羊皮膚角蛋白的表達量與雄激素作用的相關(guān)性分析
    4.1 材料與方法
        4.1.1 試驗材料
        4.1.2 主要試劑
        4.1.3 主要儀器
        4.1.4 主要試劑的配制
        4.1.5 引物設(shè)計
        4.1.6 試驗方法
    4.2 結(jié)果與討論
        4.2.1 獲得新疆和田羊毛囊總RNA
        4.2.2 內(nèi)參基因18SPCR擴增結(jié)果
        4.2.3 和田羊毛囊Kaps、Kifs基因擴增結(jié)果
        4.2.4 和田羊毛囊實時熒光定量分析
    4.3 討論
    4.4 小結(jié)
第5章 結(jié)論
參考文獻
致謝
作者簡介


【參考文獻】：
期刊論文
[1]山區(qū)型和田羊毛囊HGT蛋白KAP6.1、KAP7與KAP8的基因克隆分析[J]. 李志剛,尹闊,李樹偉.  畜牧與獸醫(yī). 2016(12)
[2]皮膚創(chuàng)傷愈合過程中短暫擴增細胞增生及皮膚干細胞遷移[J]. 王海濤,朱梓赫,李樹偉,郭景旭,王洪陽.  中國組織化學(xué)與細胞化學(xué)雜志. 2016(04)
[3]Wnt/β-catenin信號通路與毛囊的生長[J]. 蘭雪梅,楊希川.  實用皮膚病學(xué)雜志. 2015(03)
[4]對凋亡細胞TUNEL染色操作中的體會[J]. 張翠香,劉建勛,董小霞,洪曉華,王楊慧,侯金才,付建華,張偉.  實驗動物科學(xué). 2014(04)
[5]p38 MAPK信號通路在BMP-2誘導(dǎo)人牙囊細胞成骨分化中的作用[J]. 陳學(xué)鵬,施潔珺,葉青松,蔡霞,張?zhí)旌?  中國細胞生物學(xué)學(xué)報. 2013(06)
[6]和田羊毛囊KAP1.1基因的克隆及生物信息學(xué)分析[J]. 劉鑫,李樹偉,姜仁軍.  黑龍江畜牧獸醫(yī). 2013(09)
[7]遼寧絨山羊皮膚毛囊VEGF基因表達的RT-PCR檢測[J]. 姚紀(jì)元,李玉梅,徐海錄,楊金生,姜懷志.  中國獸醫(yī)學(xué)報. 2013(03)
[8]山羊β雌激素受體多克隆抗體的制備及免疫組化方法的建立[J]. 劉海港,李宏梅,王樹迎,成子強,劉法孝,竇文文,井維芳,郭慧君.  畜牧獸醫(yī)學(xué)報. 2013(02)
[9]哺乳動物毛囊結(jié)構(gòu)特征及調(diào)控機制[J]. 馬馨,陳洋,姜懷志.  中國草食動物科學(xué). 2013(01)
[10]毛囊發(fā)育與毛發(fā)生產(chǎn)研究進展[J]. 王寧,榮恩光,閆曉紅.  東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報. 2012(09)

碩士論文
[1]遼寧新品系絨山羊角蛋白家族基因的表達研究[D]. 王艷杰.遼寧師范大學(xué) 2013
[2]Wnt信號通路介導(dǎo)毛囊干細胞雙向分化的分子調(diào)控機制的初步研究[D]. 鄧立歡.廣州醫(yī)學(xué)院 2011



本文編號：3173222