多胺是動物細(xì)胞生長必需的一類活性小分子,包括腐胺、亞精胺和精胺。腐胺是其他兩種多胺合成的前體物,三種多胺之間在多胺合成酶、多胺氧化酶和亞精胺/精胺乙酰轉(zhuǎn)移酶的作用下可以互相轉(zhuǎn)化。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn),腐胺對豬腸粘膜上皮細(xì)胞（IPEC-J2）具有良好的促進(jìn)細(xì)胞增殖、遷移和抗炎的效果。但是還不清楚腐胺的這些功能是通過其本身起的作用還是通過其代謝產(chǎn)物亞精胺或精胺起的作用。為此,我們以IPEC-J2細(xì)胞為模型,通過添加多胺代謝通路抑制劑DEGBG和DFMO阻斷多胺之間的相互轉(zhuǎn)化,來揭示多胺促進(jìn)細(xì)胞增殖和遷移以及抗炎的作用機(jī)理。IPEC-J2細(xì)胞以0.5×10⁵個(gè)/mL接種在96孔板中,添加不同濃度亞精胺（1μmol/L、2μmol/L、4μmol/L、8μmol/L、16μmol/L、32μmol/L和64μmol/L）來研究亞精胺對IPEC-J2細(xì)胞的增殖作用并篩選出亞精胺適宜添加量。向培養(yǎng)基中添加不同濃度的DEGBG（0.25 mmol/L、0.5 mmol/L、1 mmol/L和2 mmol/L）來確定抑制細(xì)胞內(nèi)亞精胺生成的DEGBG適宜添加水平。通過在IPEC-J... 

【文章來源】：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京市

【文章頁數(shù)】：56 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第一章 緒論
    1.1 前言
    1.2 仔豬斷奶應(yīng)激
        1.2.1 斷奶應(yīng)激的主要影響因素
        1.2.2 斷奶應(yīng)激對仔豬腸道健康的影響
    1.3 多胺的理化性質(zhì)與代謝途徑
        1.3.1 多胺的理化性質(zhì)
        1.3.2 多胺的結(jié)構(gòu)
        1.3.3 多胺的合成途徑
        1.3.4 多胺在細(xì)胞內(nèi)的轉(zhuǎn)運(yùn)
        1.3.5 多胺在細(xì)胞內(nèi)的代謝途徑
    1.4 多胺的生物學(xué)功能
        1.4.1 多胺在血管生成中的作用
        1.4.2 多胺在抗氧化應(yīng)激上的作用
        1.4.3 多胺在細(xì)胞增殖上的作用
        1.4.4 多胺在細(xì)胞遷移上的作用
        1.4.5 多胺的抗炎作用
    1.5 腐胺促進(jìn)小腸上皮細(xì)胞損傷修復(fù)的分子機(jī)制
        1.5.1 腐胺對粘附斑激酶(Focal Adhesion Kinase,FAK)信號通路的影響
        1.5.2 腐胺對絲裂原活化蛋白激酶(Mitogen-Activated Protein Kinases,MAPK)信號通路的影響
        1.5.3 腐胺對NF-κB信號通路的影響
    1.6 本試驗(yàn)提出的問題及方案
        1.6.1 研究的目的及意義
        1.6.2 研究的內(nèi)容和擬解決的關(guān)鍵問題
        1.6.3 技術(shù)路線
第二章 試驗(yàn)材料與方法
    2.1 試驗(yàn)材料
    2.2 試驗(yàn)儀器
    2.3 細(xì)胞培養(yǎng)
    2.4 試驗(yàn)方法
        2.4.1 DEGBG合成
        2.4.2 CCK-8細(xì)胞增殖試驗(yàn)
        2.4.3 細(xì)胞遷移試驗(yàn)
        2.4.4 細(xì)胞中多胺的提取和測定
        2.4.5 細(xì)胞中RNA的提取
        2.4.6 RNA反轉(zhuǎn)錄
        2.4.7 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
        2.4.8 IPEC-J2炎癥刺激反應(yīng)模型建立
        2.4.9 細(xì)胞中蛋白測定與Western blot
        2.4.10 細(xì)胞內(nèi)過氧化氫檢測
    2.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析
第三章 試驗(yàn)結(jié)果與分析
    3.1 亞精胺對IPEC-J2細(xì)胞增殖和遷移的影響
        3.1.1 外源添加亞精胺對IPEC-J2細(xì)胞增殖的影響
        3.1.2 DEGBG對 IPEC-J2 細(xì)胞內(nèi)多胺水平的影響
        3.1.4 亞精胺對DEGBG抑制細(xì)胞增殖的緩解作用
        3.1.5 亞精胺對IPEC-J2細(xì)胞遷移的影響
    3.2 亞精胺對IPEC-J2細(xì)胞增殖和遷移的作用機(jī)制
        3.2.1 亞精胺對MAPK信號通路中關(guān)鍵基因表達(dá)的影響
        3.2.2 亞精胺對MAPK/ERK和 FAK信號通路關(guān)鍵蛋白表達(dá)的影響
        3.2.3 亞精胺對ODC蛋白表達(dá)的影響
    3.3 亞精胺對IPEC-J2細(xì)胞抗炎的作用機(jī)制
        3.3.1 亞精胺對LPS和 DEGBG誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)的緩解效果
        3.3.2 亞精胺對NF-κB信號通路關(guān)鍵蛋白表達(dá)的影響
第四章 討論
    4.1 腐胺促進(jìn)IPEC-J2細(xì)胞增殖和遷移是通過轉(zhuǎn)化為亞精胺起作用
    4.2 亞精胺促進(jìn)IPEC-J2細(xì)胞增殖和遷移的作用機(jī)制
    4.3 NF-κB信號通路介導(dǎo)亞精胺抑制IPEC-J2 細(xì)胞炎癥反應(yīng)
第五章 全文結(jié)論、創(chuàng)新點(diǎn)及后續(xù)研究展望
    5.1 全文結(jié)論
    5.2 創(chuàng)新點(diǎn)
    5.3 后續(xù)研究展望
參考文獻(xiàn)
附錄 A
致謝
作者簡歷


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
[1]腐胺調(diào)控仔豬腸黏膜上皮細(xì)胞增殖和損傷修復(fù)的機(jī)制研究[D]. 劉邦民.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2019



本文編號：3166156