[研究目的]BRD7是我室自主克隆的全長新基因,10余年來的工作基礎證實BRD7是一個抑瘤基因和核轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子,通過調(diào)控多種靶基因參與不同的信號通路,從而表現(xiàn)出不同的生物學表型,如炎癥,發(fā)育,生殖及腫瘤發(fā)生。近年來的研究表明,很多抑癌基因如PTEN、P53、 PDCD4等不僅與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關,而且參與了免疫反應和炎性疾病等正常生理和病理過程。因此,在前期成功構(gòu)建BRD7基因敲除小鼠模型的基礎上,本研究擬探討B(tài)RD7在小鼠炎癥發(fā)生中的作用和機制,為炎癥性疾病發(fā)病機制及臨床診治提供實驗基礎和理論依據(jù)。[研究方法]利用前期構(gòu)建的BRD7條件剔除小鼠模型,系統(tǒng)研究了BRD7剔除對小鼠炎癥發(fā)生的影響；通過全基因組基因芯片雜交,探討B(tài)RD7剔除前后小鼠重要免疫器官-脾臟差異基因表達譜,并通過real-time PCR進行驗證；進一步構(gòu)建LPS誘導的小鼠胚胎成纖維細胞炎癥模型和AOM/DSS聯(lián)合誘導的潰瘍性結(jié)腸炎小鼠模型,探討B(tài)RD7剔除對LPS誘導MEF細胞及AOM/DSS誘導的小鼠結(jié)腸炎癥發(fā)生發(fā)展的影響,并通過qRT-PCR或免疫組化技術分別在MEF細胞和小鼠結(jié)腸炎組織中對BRD7介導的... 

【文章來源】：中南大學湖南省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：73 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
目錄
主要縮寫詞簡表
第一章 前言
第二章 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 所用細胞
        2.1.2 實驗動物
        2.1.3 主要試劑
        2.1.4 主要溶液配制
        2.1.5 主要儀器
        2.1.6 引物
    2.2 實驗方法
        2.2.1 小鼠基因型鑒定
        2.2.2 小鼠組織蛋白水平鑒定
        2.2.3 制備小鼠胚胎成纖維細胞
        2.2.4 實時定量PCR檢測LPS誘導MEF細胞后炎癥因子的表達
        2.2.5 小鼠潰瘍性結(jié)腸炎模型的建立
        2.2.6 標本采集
        2.2.7 結(jié)直腸組織病理學檢測
        2.2.8 免疫組織化學
        2.2.9 免疫熒光
    2.3 數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計學分析
第三章 結(jié)果
    3.1 實驗小鼠鼠尾基因型鑒定及部分組織BRD7蛋白水平的檢測
    3.2 BRD7缺失容易導致小鼠體表炎癥及脾臟形態(tài)結(jié)構(gòu)的異常
        3.2.1 BRD7缺失容易導致小鼠體表炎癥
        3.2.2 BRD7缺失易導致免疫器官脾形態(tài)和結(jié)構(gòu)的異常
    3.3 脾臟全基因組芯片雜交及芯片驗證
        3.3.1 脾臟RNA的抽提及BRD7的表達鑒定
        3.3.2 脾臟全基因組芯片雜交,構(gòu)建差異基因表達譜
        3.3.3 芯片驗證
    3.4 構(gòu)建LPS誘導的小鼠胚胎成纖維細胞炎癥模型
        3.4.1 MEF細胞的制備
        3.4.2 real-time PCR檢測LPS誘導MEF細胞后炎癥因子mRNA水平的表達
    3.5 構(gòu)建AOM/DSS聯(lián)合誘導的小鼠潰瘍性結(jié)腸炎動物模型
        3.5.1 建模動物的一般狀況觀察
        3.5.2 病理組織學改變及病例檢測
    3.6 免疫組織化學及免疫熒光實驗證實BRD7通過IL-6、TNFA、CXCL1、INOS介導的NF-κB信號通路參與了炎癥的發(fā)生
        3.6.1 免疫組織化學結(jié)果
        3.6.2 免疫熒光結(jié)果
第四章 討論
    4.1 基因敲除小鼠模型是研究BRD7在體內(nèi)的新表型、生物學功能和機制的良好模型
    4.2 炎癥模型的構(gòu)建
        4.2.1 LPS誘導的小鼠胚胎成纖維細胞炎癥模型
        4.2.2 AOM/DSS聯(lián)合誘導的小鼠潰瘍性結(jié)腸炎模型
    4.3 BRD7參與小鼠炎癥發(fā)生的機制
第五章 結(jié)論
參考文獻
綜述
    參考文獻
攻讀碩士學位期間主要研究成果
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]Association between TNF-a and IL-1β genotypes vs Helicobacter pylori infection in Indonesia[J]. Yang Zhao,Jing-Wen Wang,Tsutomu Tanaka,Akihiro Hosono,Ryosuke Ando,Shinkan Tokudome,Soeripto,FX Ediati Triningsih,Tegu Triono,Suwignyo Sumoharjo,EY Wenny Astuti Achwan,Stephanus Gunawan,Yu-Min Li.  World Journal of Gastroenterology. 2013(46)
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[5]Dextran sulfate sodium-induced colitis-associated neoplasia:a promising model for the development of chemopreventive interventions[J]. Margie Lee CLAPPER,Harry Stanley COOPER,Wen-Chi Lee CHANG.  Acta Pharmacologica Sinica. 2007(09)



本文編號：3165274