[研究目的]BRD7是我室自主克隆的全長(zhǎng)新基因,10余年來(lái)的工作基礎(chǔ)證實(shí)BRD7是一個(gè)抑瘤基因和核轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子,通過(guò)調(diào)控多種靶基因參與不同的信號(hào)通路,從而表現(xiàn)出不同的生物學(xué)表型,如炎癥,發(fā)育,生殖及腫瘤發(fā)生。近年來(lái)的研究表明,很多抑癌基因如PTEN、P53、 PDCD4等不僅與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān),而且參與了免疫反應(yīng)和炎性疾病等正常生理和病理過(guò)程。因此,在前期成功構(gòu)建BRD7基因敲除小鼠模型的基礎(chǔ)上,本研究擬探討B(tài)RD7在小鼠炎癥發(fā)生中的作用和機(jī)制,為炎癥性疾病發(fā)病機(jī)制及臨床診治提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)和理論依據(jù)。[研究方法]利用前期構(gòu)建的BRD7條件剔除小鼠模型,系統(tǒng)研究了BRD7剔除對(duì)小鼠炎癥發(fā)生的影響；通過(guò)全基因組基因芯片雜交,探討B(tài)RD7剔除前后小鼠重要免疫器官-脾臟差異基因表達(dá)譜,并通過(guò)real-time PCR進(jìn)行驗(yàn)證；進(jìn)一步構(gòu)建LPS誘導(dǎo)的小鼠胚胎成纖維細(xì)胞炎癥模型和AOM/DSS聯(lián)合誘導(dǎo)的潰瘍性結(jié)腸炎小鼠模型,探討B(tài)RD7剔除對(duì)LPS誘導(dǎo)MEF細(xì)胞及AOM/DSS誘導(dǎo)的小鼠結(jié)腸炎癥發(fā)生發(fā)展的影響,并通過(guò)qRT-PCR或免疫組化技術(shù)分別在MEF細(xì)胞和小鼠結(jié)腸炎組織中對(duì)BRD7介導(dǎo)的... 

【文章來(lái)源】：中南大學(xué)湖南省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：73 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
目錄
主要縮寫詞簡(jiǎn)表
第一章 前言
第二章 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 所用細(xì)胞
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2.1.3 主要試劑
        2.1.4 主要溶液配制
        2.1.5 主要儀器
        2.1.6 引物
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 小鼠基因型鑒定
        2.2.2 小鼠組織蛋白水平鑒定
        2.2.3 制備小鼠胚胎成纖維細(xì)胞
        2.2.4 實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)LPS誘導(dǎo)MEF細(xì)胞后炎癥因子的表達(dá)
        2.2.5 小鼠潰瘍性結(jié)腸炎模型的建立
        2.2.6 標(biāo)本采集
        2.2.7 結(jié)直腸組織病理學(xué)檢測(cè)
        2.2.8 免疫組織化學(xué)
        2.2.9 免疫熒光
    2.3 數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
第三章 結(jié)果
    3.1 實(shí)驗(yàn)小鼠鼠尾基因型鑒定及部分組織BRD7蛋白水平的檢測(cè)
    3.2 BRD7缺失容易導(dǎo)致小鼠體表炎癥及脾臟形態(tài)結(jié)構(gòu)的異常
        3.2.1 BRD7缺失容易導(dǎo)致小鼠體表炎癥
        3.2.2 BRD7缺失易導(dǎo)致免疫器官脾形態(tài)和結(jié)構(gòu)的異常
    3.3 脾臟全基因組芯片雜交及芯片驗(yàn)證
        3.3.1 脾臟RNA的抽提及BRD7的表達(dá)鑒定
        3.3.2 脾臟全基因組芯片雜交,構(gòu)建差異基因表達(dá)譜
        3.3.3 芯片驗(yàn)證
    3.4 構(gòu)建LPS誘導(dǎo)的小鼠胚胎成纖維細(xì)胞炎癥模型
        3.4.1 MEF細(xì)胞的制備
        3.4.2 real-time PCR檢測(cè)LPS誘導(dǎo)MEF細(xì)胞后炎癥因子mRNA水平的表達(dá)
    3.5 構(gòu)建AOM/DSS聯(lián)合誘導(dǎo)的小鼠潰瘍性結(jié)腸炎動(dòng)物模型
        3.5.1 建模動(dòng)物的一般狀況觀察
        3.5.2 病理組織學(xué)改變及病例檢測(cè)
    3.6 免疫組織化學(xué)及免疫熒光實(shí)驗(yàn)證實(shí)BRD7通過(guò)IL-6、TNFA、CXCL1、INOS介導(dǎo)的NF-κB信號(hào)通路參與了炎癥的發(fā)生
        3.6.1 免疫組織化學(xué)結(jié)果
        3.6.2 免疫熒光結(jié)果
第四章 討論
    4.1 基因敲除小鼠模型是研究BRD7在體內(nèi)的新表型、生物學(xué)功能和機(jī)制的良好模型
    4.2 炎癥模型的構(gòu)建
        4.2.1 LPS誘導(dǎo)的小鼠胚胎成纖維細(xì)胞炎癥模型
        4.2.2 AOM/DSS聯(lián)合誘導(dǎo)的小鼠潰瘍性結(jié)腸炎模型
    4.3 BRD7參與小鼠炎癥發(fā)生的機(jī)制
第五章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
攻讀碩士學(xué)位期間主要研究成果
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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