豬霍亂沙門(mén)菌（Salmonella enterica serovar Choleraesuis,S.Choleraesuis）是一種非傷寒沙門(mén)菌,是誘發(fā)仔豬副傷寒的主要病原體,給中國(guó)的養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。中國(guó)預(yù)防S.Choleraesuis最有效的疫苗是C500,C500是通過(guò)化學(xué)誘變獲得的一株遺傳穩(wěn)定、免疫性較好的弱毒株。雖然C500弱毒活疫苗使用以來(lái),我國(guó)的仔豬副傷寒得到有效控制,但是該弱毒株仍有較高的殘余毒力,且遺傳背景不清楚,因此需要對(duì)C500進(jìn)行優(yōu)化,以獲得更安全的減毒活疫苗。通過(guò)對(duì)C500株測(cè)序發(fā)現(xiàn),C500有多個(gè)基因缺失或失活,包括asr、ydgF、ydgD、ydgE、rpoS和ptsG;對(duì)這些基因進(jìn)行分析及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),rpoS基因的失活是C500主要的減毒方式,這為開(kāi)發(fā)更加安全的豬霍亂疫苗提供了研究基礎(chǔ)。本文以C500疫苗株為背景菌株,回復(fù)其rpoS基因的活性,使其具備像野生株侵襲細(xì)胞的能力;然后再以回復(fù)了rpoS基因活性的減毒株為背景株,分別缺失crp、fur、phop、aroA等基因,再?gòu)倪@四株重組減毒株中篩選一株免疫原性較好,副作用小的疫苗株。將該疫苗株... 

【文章來(lái)源】：西南大學(xué)重慶市 211工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1 豬鏈球菌的研究概況
        1.1 病原學(xué)和流行病學(xué)
        1.2 臨床癥狀和病理變化
        1.3 診斷和防治
    2 豬霍亂沙門(mén)菌C500作為載體的研究概況
        2.1 荷載異源抗原的減毒沙門(mén)菌誘發(fā)免疫的機(jī)制
        2.2 C500載體系統(tǒng)的研究概況
        2.3 C500載體系統(tǒng)存在的優(yōu)勢(shì)與局限
第二章 引言
第三章 豬霍亂沙門(mén)菌重組減毒株的構(gòu)建
    1 材料
        1.1 菌株和質(zhì)粒
        1.2 主要試劑
        1.3 主要儀器設(shè)備
        1.4 相關(guān)主要培養(yǎng)基、試劑的配制
    2 試驗(yàn)方法
        2.1 構(gòu)建豬霍亂沙門(mén)菌重組減毒株的策略
        2.2 引物設(shè)計(jì)
        2.3 自殺質(zhì)粒的構(gòu)建
        2.4 回復(fù)rpoS基因同源重組供體菌的制備
        2.5 同源重組
        2.6 rpoS基因的回復(fù)的驗(yàn)證
        2.7 C5001、C5002、C5003、C5004突變株的構(gòu)建
    3 結(jié)果與分析
        3.1 自殺質(zhì)粒的構(gòu)建
        3.2 突變株的鑒定
        3.3 rpoS基因回復(fù)的驗(yàn)證
        3.4 C5001、C5002、C5003、C5004減毒株的構(gòu)建
    4 討論
第四章 重組減毒株的生物學(xué)特性研究
    1 試驗(yàn)材料
        1.1 菌株、動(dòng)物
        1.2 主要試劑
        1.3 主要儀器設(shè)備
        1.4 相關(guān)主要培養(yǎng)基、試劑的配制
    2 試驗(yàn)方法
        2.1 各菌株生長(zhǎng)曲線的測(cè)定
        2.2 運(yùn)行性檢測(cè)
        2.3 菌株的定植實(shí)驗(yàn)
        2.4 攻毒保護(hù)實(shí)驗(yàn)
        2.5 抗體水平的檢測(cè)
    3 結(jié)果
        3.0 各減毒株生長(zhǎng)曲線的測(cè)定
        3.1 運(yùn)動(dòng)型檢測(cè)
        3.2 定植
        3.3 LPS和外膜蛋白提取檢測(cè)
        3.4 抗體水平檢測(cè)
        3.5 免疫保護(hù)
    4 討論
第五章 減毒豬霍亂沙門(mén)菌遞呈豬鏈球菌STK、GDH、ccp A蛋白的構(gòu)建及其免疫原性初探
    1 材料
        1.1 菌株、質(zhì)粒和動(dòng)物
        1.2 主要試劑
        1.3 主要儀器設(shè)備
        1.4 相關(guān)主要溶液的配制
    2 試驗(yàn)方法
        2.1 試驗(yàn)引物
        2.2 豬鏈球菌2型stk、gdh、ccp A基因的克隆
        2.3 相關(guān)蛋白在BL21中的表達(dá)及可溶性蛋白的純化
        2.4 針對(duì)相關(guān)蛋白的兔抗血清的制備,純化及其效價(jià)的測(cè)定
        2.5 豬鏈球菌SC19菌株LD50的測(cè)定
        2.6 C5001(stk、gdh、ccp A)菌株的構(gòu)建及其表達(dá)
        2.7 C5001(p YA3494-stk)、C5001(p YA3494-gdh)、C5001(p YA3494-ccp A)菌株的生物學(xué)特性
    3 結(jié)果
        3.0 豬鏈球菌2型stk、gdh、ccp A基因的克隆
        3.1 p ET28a-stk、p ET30a-gdh、p ET28a-ccp A質(zhì)粒的構(gòu)建
        3.2 相關(guān)蛋白在BL21中的表達(dá)及可溶性蛋白的純化
        3.3 針對(duì)相關(guān)蛋白的兔抗血清的制備及其效價(jià)的測(cè)定
        3.4 豬鏈球菌SC19菌株LD50的測(cè)定
        3.5 重組沙門(mén)菌C5001載體的構(gòu)建及基因的克隆
        3.6 stk,gdh,ccp A蛋白在C5001 中的表達(dá)
        3.7 抗體水平檢測(cè)結(jié)果
        3.8 動(dòng)物保護(hù)性試驗(yàn)
    4.討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
發(fā)表論文和申請(qǐng)專(zhuān)利


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號(hào)：3165403