斯鈣素1（Stanniocalcinl, STC1）是一種首先在硬骨類魚中發(fā)現(xiàn)的糖蛋白激素,由魚類特有的內(nèi)分泌腺斯坦尼氏小體（corpuscles of stannius, CS）所分泌。在魚類體內(nèi),STC1通過降低鰓和腸對鈣的吸收、增加腎臟對磷酸鹽的重吸收,來維持體內(nèi)礦物質代謝的動態(tài)平衡。研究表明STC1也在哺乳動物體內(nèi)參與了鈣磷穩(wěn)態(tài)的調(diào)控,與已知多種鈣磷代謝調(diào)節(jié)因子骨鈣素（0C）、骨保護素（OPG）和胰島素樣生長因子-1（IGF-1）等有互為靶標的復雜聯(lián)系。IGF-1是一具多種功能的調(diào)控因子,參與了機體細胞分化、增殖和成熟等有關的重要生理功能。研究表明,IGF-1與哺乳動物體內(nèi)鈣磷調(diào)節(jié)與代謝相關因子存在密切的聯(lián)系。機體鈣磷穩(wěn)態(tài)的維持依賴于小腸、腎臟和骨骼三種器官以及維生素D、甲狀旁腺素、降鈣素等激素密切協(xié)調(diào)作用而實現(xiàn)的。因此,研究IGF-1在小腸上皮細胞中對STC1的影響,可以為鈣磷代謝穩(wěn)態(tài)的調(diào)控及代謝紊亂疾病防治提供新的理論基礎和實驗依據(jù)。本實驗利用Caco2細胞作為小腸上皮細胞模型,研究IGF-1對STC1表達的影響。通過不同濃度的外源IGF-1不同時間段的處理,然后利用熒光定... 

【文章來源】：華中農(nóng)業(yè)大學湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：61 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞表
第一部分 文獻綜述
    1 斯鈣素的研究進展
        1.1 斯鈣素的發(fā)現(xiàn)與功能概述
        1.2 斯鈣素的結構
        1.3 斯鈣素的表達及定位
        1.4 斯鈣素的主要生理作用
            1.4.1 STC1與鈣磷
            1.4.2 STC1與泌尿系統(tǒng)
            1.4.3 STC1與妊娠
            1.4.4 STC1與運動系統(tǒng)
            1.4.5 STC1與腫瘤
    2 胰島素樣生長因子-1(IGF-1)的研究進展
        2.1 IGF-1的發(fā)現(xiàn)
        2.2 IGF-1的結構
        2.3 IGF-1的主要功能
            2.3.1 IGF-1與生長發(fā)育
            2.3.2 IGF-1與代謝作用
    3 Caco2細胞的研究進展
    4 斯鈣素1、IGF-1參與鈣磷穩(wěn)態(tài)調(diào)節(jié)的研究進展
    5 熒光定量PCR技術
        5.1 熒光定量PCR技術原理
        5.2 相對定量PCR
        5.3 絕對定量PCR
第二部分 實驗研究部分
    1 前言
    2 實驗材料
        2.1 細胞系
        2.2 主要試劑及耗材
        2.3 主要儀器設備
        2.4 主要溶液培養(yǎng)基及其配置
            2.4.1 IMDM培養(yǎng)液的配制
            2.4.2 PBS平衡鹽溶液的配制和消毒
            2.4.3 D-Hanks溶液配置和消毒
            2.4.4 0.25%胰蛋白酶消化液的配制和滅菌
            2.4.5 LB培養(yǎng)基的配置
            2.4.6 0.1mol/L CaCl_2溶液和0.1mol/L CaCl_2-15%甘油溶液的配制
            2.4.7 電泳緩沖液TAE的配制
    3 實驗方法
        3.1 Caco2細胞的培養(yǎng)
        3.2 質粒標準品的構建
            3.2.1 感受態(tài)菌的制備
            3.2.2 總RNA的提取和STC1基因擴增
            3.2.3 TA克隆及轉化
            3.2.4 質粒少量提取
            3.2.5 質粒標準品的PCR鑒定
        3.3 IGF-1最適濃度的選取
            3.3.1 實驗分組
            3.3.2 RNA的提取與熒光定量PCR
        3.4 不同時間相同濃度IGF-1處理Caco2細胞
        3.5 絕對定量PCR
            3.5.1 建立標準曲線
            3.5.2 RNA、cDNA濃度測定
            3.5.3 絕對定量
        3.6 蛋白提取
            3.6.1 細胞裂解提取總蛋白
            3.6.2 蛋白濃度測定
        3.7 Western blot
            3.7.1 SDS-PAGE電泳
            3.7.2 免疫印跡操作-轉膜
            3.7.3 免疫檢測
            3.7.4 化學發(fā)光與曝光
    4 實驗結果與分析
        4.1 質粒標準品的構建
            4.1.1 目的片段的提取
            4.1.2 質粒標準品的PCR鑒定
            4.1.3 質粒標準品的測序鑒定
        4.2 建立標準曲線結果
            4.2.1 質粒標準品拷貝數(shù)的測定結果
            4.2.2 繪制標準曲線結果
        4.3 RNA的提取
        4.4 IGF-1最適濃度選取相對定量及Western blot結果
            4.4.1 相對定量結果
            4.4.2 Western blot結果
        4.5 最適濃度IGF-1分不同時間處理Caco2細胞的絕對定量及western blot結果
            4.5.1 絕對定量結果
            4.5.2 Western blot結果
    5 討論
        5.1 絕對定量標準曲線的制備
        5.2 IGF-1最適濃度的選取
        5.3 最適濃度IGF-1分不同時間處理Caco2細胞
    6 結論
參考文獻
致謝
附錄


【參考文獻】：
期刊論文
[1]胰島素樣生長因子-1的研究進展[J]. 李江,董作亮.  國際檢驗醫(yī)學雜志. 2013(07)
[2]胰島素樣生長因子IGF-1的研究進展[J]. 邢海權,閆夢菲.  畜禽業(yè). 2011(08)
[3]斯鈣素的相關研究概述[J]. 任雪平.  商丘師范學院學報. 2010(03)
[4]人類斯鈣素生物學特性的相關研究[J]. 張延濤,王靜蓉,李曉燕.  醫(yī)學綜述. 2009(19)
[5]斯鈣素的研究進展[J]. 陳維娜,朱廣瑾.  生理科學進展. 2008(03)
[6]人類斯鈣素1的生物學特性研究進展[J]. 唐小龍,張洹.  中國病理生理雜志. 2008(03)
[7]哺乳動物斯鈣素-1的研究[J]. 楊玫,周安國,王之盛.  飼料工業(yè). 2007(12)
[8]胰島素樣生長因子-1研究進展[J]. 段宇.  國外醫(yī)學.內(nèi)分泌學分冊. 2001(06)
[9]人和哺乳動物斯鈣素研究概況[J]. 李衛(wèi)國,李金亭,高春建.  生理科學進展. 2000(01)

博士論文
[1]ARC及IGF-1在AS肉雞中抗心肌細胞凋亡作用的研究[D]. 席照房.華中農(nóng)業(yè)大學 2012

碩士論文
[1]Caco-2細胞中葡萄糖、中性氨基酸和二肽（Lys-Phe）轉運載體基因和蛋白表達對底物反應模式的比較研究[D]. 呂麗萍.山東農(nóng)業(yè)大學 2012



本文編號：3165182