LKB1/AMPK信號通路廣泛參與機體細(xì)胞的增殖、分化和凋亡等生理活動,調(diào)控能量代謝等生命活動。而LKB1基因作為AMPK上游關(guān)鍵基因之一,其突變或者失活會引起AMPK信號通路變化,由此導(dǎo)致人類胃腸道疾病發(fā)生。因此，本試驗旨在研究LKB1/AMPK信號通路內(nèi)信號因子在家兔非特異性腸炎中的表達(dá)差異和作用機制,從而為家兔非特異性腸炎治療和預(yù)防提供理論依據(jù)。試驗前期克隆LKB1基因并通過構(gòu)建低纖維日糧誘導(dǎo)家免非特異性腸炎模型,采用RT-qPCR法檢測LKB1、AMPK （PRKAA2）、mTOR和NF-κβ基因在健康正常組（30只）和低纖維誘導(dǎo)腸炎組（60只）中7個組織（十二指腸、圓小囊、空腸、回腸、結(jié)腸、肝臟和脾臟）的mRNA表達(dá)量。試驗后期通過培養(yǎng)家兔結(jié)腸上皮細(xì)胞（CEC）以及利用LPS構(gòu)建家兔CEC炎癥模型，采用RNAi技術(shù)干擾炎癥細(xì)胞中LKB1基因的表達(dá),然后通過RT-qPCR法檢測LKB1、PRKAA2、NUAK1、mTOR、NF-κβ、IL-1A、TNF-α、PGC-1α和ATG13基因在不同炎癥細(xì)胞組中mRNA表達(dá)量,由此分析LKB1/AMPK信號通路在家兔非特異性腸炎中的作用... 

【文章來源】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)四川省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
學(xué)術(shù)名詞簡表
1 文獻(xiàn)綜述
    1.1 腸炎發(fā)生分子機制研究
    1.2 LKB1基因的發(fā)現(xiàn)及其分子結(jié)構(gòu)
    1.3 LKB1基因的調(diào)節(jié)方式
    1.4 LKB1基因功能
        1.4.1 對T細(xì)胞發(fā)育影響
        1.4.2 促進(jìn)成肌細(xì)胞分化
        1.4.3 可變剪切體LKB1s與精細(xì)胞形成
        1.4.4 LKB1對細(xì)胞極性調(diào)節(jié)
        1.4.5 LKB1與癌癥發(fā)生關(guān)系
    1.5 LKB1基因相關(guān)信號通路
        1.5.1 LKB1/AMPK信號通路與能量代謝
        1.5.2 AMPK/SIRT1/NF-κβ信號通路介導(dǎo)炎癥反應(yīng)
        1.5.3 LKB1/AMPK/mTOR信號通路與癌癥發(fā)生
    1.6 本研究的目的和意義
        1.6.1 試驗?zāi)康?br>        1.6.2 試驗研究的主要內(nèi)容
    1.7 本研究的目的和意義
2 材料與方法
    2.1 試驗材料
    2.2 儀器與試劑
    2.3 試驗方法
        2.3.1 各組織總RNA的提取
        2.3.2 總RNA質(zhì)量檢測
        2.3.3 反轉(zhuǎn)錄合成cDNA
        2.3.4 克隆LKB1基因
        2.3.5 組織定量表達(dá)分析
    2.4 細(xì)胞試驗
        2.4.1 細(xì)胞傳代
        2.4.2 冷凍和復(fù)蘇細(xì)胞
        2.4.3 細(xì)胞計數(shù)
        2.4.4 siRNA序列及相關(guān)基因引物信息
        2.4.5 篩選siRNA分子及檢測炎癥細(xì)胞中各基因表達(dá)水平
3 試驗結(jié)果
    3.1 LKB1基因克隆及序列分析
        3.1.1 RNA質(zhì)量的檢測
        3.1.2 LKB1基因克隆結(jié)果
        3.1.3 測序及生物信息學(xué)分析結(jié)果
    3.2 檢測腸炎模型組各組織基因表達(dá)
    3.3 細(xì)胞試驗結(jié)果
        3.3.1 CEC細(xì)胞培養(yǎng)及觀察
        3.3.2 細(xì)胞生長曲線
        3.3.3 構(gòu)建細(xì)胞炎癥模型
    3.4 篩選干擾siRNA序列
        3.4.1 細(xì)胞總RNA提取及反轉(zhuǎn)錄
        3.4.2 轉(zhuǎn)染及篩選siRNA
    3.5 干擾LKB1基因?qū)MPK信號通路相關(guān)基因表達(dá)結(jié)果
        3.5.1 LKB1/AMPK信號通路下游相關(guān)基因表達(dá)
        3.5.2 PGC-1α和ATG13表達(dá)
    3.6 炎癥細(xì)胞中促炎因子IL-lA和TNF-a表達(dá)結(jié)果
4 討論
    4.1 克隆及生物信息學(xué)分析
    4.2 腸炎模型組各組織表達(dá)分析
        4.2.1 LKB1組織表達(dá)分析
        4.2.2 與LKB1相關(guān)基因的組織表達(dá)分析
    4.3 轉(zhuǎn)染si-02-LKB1對炎癥細(xì)胞模型中信號因子表達(dá)影響
        4.3.1 PGC-1α和ATG13表達(dá)差異分析
        4.3.2 AMPK激酶及其相關(guān)信號因子表達(dá)差異分析
        4.3.3 促炎因子IL-1A和TNF-α表達(dá)差異分析
5 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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[4]不同ADF水平飼糧對肉兔生產(chǎn)性能、腸道粘膜免疫及盲腸發(fā)酵的影響[D]. 彭全輝.四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 2008



本文編號：3164771