白細(xì)胞介素21（Interleukin-21,IL-21）是1種具有廣泛免疫調(diào)節(jié)作用的新型細(xì)胞因子,在固有免疫和適應(yīng)性免疫應(yīng)答中都發(fā)揮著重要的作用。目前,對(duì)人IL-21和鼠IL-21的研究已相當(dāng)多,而對(duì)于豬IL-21的研究卻鮮有報(bào)道。為了進(jìn)行豬IL-21相關(guān)功能機(jī)制研究,本研究構(gòu)建了真核表達(dá)載體pcDNA3.1/IL-21-Fc,將該重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞進(jìn)行瞬時(shí)表達(dá),利用protein A親和層析法純化轉(zhuǎn)染上清中的目的蛋白,通過(guò)Western blot、ELISA鑒定純化的目的蛋白的純度和活性,并對(duì)豬IL-21的生物學(xué)功能進(jìn)行了一定的探索。結(jié)果顯示,豬IL-21-Fc融合蛋白成功在培養(yǎng)上清中分泌表達(dá);通過(guò)純化獲得了分子量約為44 kDa的豬IL-21-Fc融合蛋白;功能研究表明,豬IL-21能夠與CD40L協(xié)同呈劑量依懶性地刺激豬外周血淋巴細(xì)胞（peripheral blood lymphocytes,PBMC）分泌IgG,并能誘導(dǎo)豬PBMC表達(dá)IL-22。單克隆抗體作為蛋白功能研究中蛋白檢測(cè)的重要工具,當(dāng)前市場(chǎng)上尚未有抗豬IL-21單克隆抗體,從而阻礙了豬IL-21的研究進(jìn)展。本... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京市

【文章頁(yè)數(shù)】：54 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
英文縮略表
第一章 引言
    1.1 白介素21(IL-21)
        1.1.1 IL-21基因
        1.1.2 IL-21受體(IL-21R)及IL-21/IL-21R信號(hào)
        1.1.3 IL-21的生物學(xué)作用
        1.1.4 IL-21與疾病
    1.2 豬IL-21研究進(jìn)展
    1.3 單克隆抗體技術(shù)
    1.4 研究目的和意義
第二章 豬IL-21的真核表達(dá)與功能研究
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 細(xì)胞,載體
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 主要儀器
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 真核表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3.1/IL-21-Fc的構(gòu)建
        2.2.2 重組豬IL-21蛋白的表達(dá)與純化
        2.2.3 豬IL-21融合蛋白的生物學(xué)活性研究
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.3.1 重組質(zhì)粒pcDNA3.1(-)/IL-21-Fc的構(gòu)建
        2.3.2 豬IL-21-Fc融合蛋白的表達(dá)
        2.3.3 重組IL-21的純化與鑒定
        2.3.4 豬IL-21的功能研究
    2.4 討論
第三章 豬IL-21單克隆抗體的制備與鑒定
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 細(xì)胞,載體,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        3.1.2 主要試劑及培養(yǎng)基
        3.1.3 主要儀器及耗材
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 豬IL-21抗原的制備
        3.2.2 鼠抗豬IL-21單克隆抗體的制備
        3.2.3 單克隆抗體腹水的制備、純化與效價(jià)測(cè)定
        3.2.4 鼠抗豬IL-21單克隆抗體的鑒定
        3.2.5 數(shù)據(jù)分析
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1 重組豬IL-21蛋白的原核表達(dá)、純化
        3.3.2 抗豬IL-21單克隆抗體的篩選和亞類鑒定
        3.3.3 單克隆抗體腹水的效價(jià)測(cè)定及純化
        3.3.4 單克隆抗體可變區(qū)的擴(kuò)增與進(jìn)化樹(shù)分析
        3.3.5 Western blot鑒定
        3.3.6 IFA鑒定
        3.3.7 單克隆抗體的流式分析
        3.3.8 單克隆抗體的相對(duì)親合常數(shù)測(cè)定
    3.4 討論
第四章 全文結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡(jiǎn)歷



本文編號(hào)：3164768