豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）,是一種免疫抑制性RNA病毒,給全世界范圍內(nèi)養(yǎng)豬行業(yè)帶來了巨大的經(jīng)濟(jì)損失,由于PRRSV的致病機(jī)制尚不明確,故目前未能有效根除該疾病,最近研究表明PRRSV感染機(jī)體后會(huì)誘發(fā)機(jī)體產(chǎn)生自噬現(xiàn)象,并且利用機(jī)體細(xì)胞的自噬進(jìn)行病毒自身的復(fù)制,而自噬靶蛋白m TOR是一種絲氨酸/蘇氨酸激酶,是自噬信號(hào)通路中重要的靶點(diǎn),可以調(diào)控下游蛋白磷酸化,從而影響下游通路的正常運(yùn)行。樹突狀細(xì)胞是聯(lián)系天然免疫和特異性的天然橋梁,在免疫應(yīng)答中發(fā)揮重要作用。故本論文旨在通過研究PRRSV感染引起樹突狀細(xì)胞發(fā)生自噬,進(jìn)而采用自噬的激活劑以及抑制劑來調(diào)節(jié)自噬的主要靶點(diǎn),從而通過調(diào)節(jié)自噬水平來達(dá)到抑制PRRSV復(fù)制的目的。本實(shí)驗(yàn)共分為6組,分別為DC（樹突狀細(xì)胞）對(duì)照組,Rapa（雷帕霉素）處理組,3-MA（3-甲基腺嘌呤）處理組,PRRSV組,Rapa+PRRSV組和3-MA+PRRSV組。首先誘導(dǎo)培養(yǎng)樹突狀細(xì)胞以及測(cè)定PRRSV毒價(jià),其次檢測(cè)了PRRSV對(duì)樹突狀細(xì)胞抗原提呈功能及自噬的影響,最后分別通過自噬激活劑和抑制劑來調(diào)節(jié)自噬靶蛋m TOR,進(jìn)而檢測(cè)自噬靶蛋白m TOR在PRRS... 

【文章來源】：沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)遼寧省

【文章頁數(shù)】：59 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
英文縮略表
文獻(xiàn)綜述
    1.1 豬繁殖與呼吸綜合征的概述
        1.1.1 流行病學(xué)
        1.1.2 PRRSV的病原學(xué)特征
        1.1.3 PRRSV的易感細(xì)胞
        1.1.4 致病機(jī)制
    1.2 自噬的研究進(jìn)展
        1.2.1 自噬的發(fā)生以及分類
        1.2.2 細(xì)胞自噬的檢測(cè)方法
        1.2.3 自噬與凋亡的區(qū)別
        1.2.4 mTOR信號(hào)通路的生物學(xué)功能
        1.2.5 PI3K和(mTOR)信號(hào)通路在(PRRSV)復(fù)制中的作用
第一章 樹突狀細(xì)胞的誘導(dǎo)培養(yǎng)及PRRSV毒價(jià)的測(cè)定
    1.1 材料
        1.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物及PRRSV來源
        1.1.2 主要耗材
        1.1.3 主要藥品以及試劑
        1.1.4 主要儀器設(shè)備
        1.1.5 藥品與試劑的制備
        1.1.6 設(shè)計(jì)合成引物
    1.2 試驗(yàn)方法
        1.2.1 PRRSV的培養(yǎng)
        1.2.2 TCID_(50)測(cè)定
        1.2.3 豬外周血的采集
    1.3 試驗(yàn)結(jié)果與分析
        1.3.1 TCID_(50)測(cè)定結(jié)果
        1.3.2 樹突狀細(xì)胞原代培養(yǎng)及誘導(dǎo)的結(jié)果
    1.4 討論
        1.4.1 影響PRRSV毒價(jià)的測(cè)定的因素
        1.4.2 影響樹突細(xì)胞的誘導(dǎo)的因素
    1.5 小結(jié)
第二章 PRRSV感染對(duì)樹突狀細(xì)胞自噬和抗原提呈功能的影響
    2.1 材料與方法
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)對(duì)象
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)耗材
        2.1.3 藥品及試劑
        2.1.4 儀器與設(shè)備
        2.1.5 主要藥品與試劑的配制
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 樹突狀細(xì)胞接種PRRSV
        2.2.2 MDC染色最佳濃度與最佳時(shí)間的確定
        2.2.3 PRRSV接種樹突狀細(xì)胞后激光共聚焦的檢測(cè)
        2.2.4 PRRSV接種樹突狀細(xì)胞后不同時(shí)間段病毒載量的檢測(cè)
        2.2.5 樹突狀細(xì)胞接種PRRSV后自噬基因與抗原提呈基因的檢測(cè)
        2.2.6 樹突狀細(xì)胞接種PRRSV后凋亡基因的檢測(cè)
        2.2.7 Western blot方法檢測(cè)LC 3I/II蛋白的表達(dá)量
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 樹突狀細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化
        2.3.2 MDC最適濃度與時(shí)間的篩選結(jié)果
        2.3.3 激光共聚焦檢測(cè)
        2.3.4 PRRSV的病毒載量檢測(cè)結(jié)果
        2.3.5 樹突狀細(xì)胞自噬和抗原提呈基因的檢測(cè)結(jié)果
        2.3.6 PRRSV感染后凋亡基因的變化情況
        2.3.7 PRRSV感染組與正常組DCs的LC3I/II蛋白表達(dá)量變化情況
    2.4 討論
    2.5 小結(jié)
第三章 自噬靶蛋白MTOR在PRRSV感染中對(duì)樹突狀細(xì)胞抗原提呈功能調(diào)控的研究
    3.1 材料
        3.1.1 主要耗材
        3.1.2 主要藥品與試劑
        3.1.3 主要儀器設(shè)備
        3.1.4 主要藥品與試劑的配制
        3.1.5 設(shè)計(jì)合成引物
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 自噬激活劑Rapa最適濃度和時(shí)間的篩選
        3.2.2 自噬抑制劑3-MA最適濃度和時(shí)間的篩選
        3.2.3 不同處理組經(jīng)過MDC染色后的倒置熒光顯微鏡觀察
        3.2.4 不同處理組經(jīng)過MDC染色后的激光共聚焦顯微鏡觀察
        3.2.5 Rapa與3-Ma對(duì)PRRSV的病毒載量影響的檢測(cè)
        3.2.6 不同處理組自噬基因與抗原提呈基因的檢測(cè)
        3.2.7 Rapa/3-MA預(yù)處理1h后加入PRRSV與Rapa/3-MA和PRRSV同時(shí)加入的自噬與抗原提呈基因的檢測(cè)
        3.2.8 Western Blot檢測(cè)自噬相關(guān)蛋白的表達(dá)量
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 Rapa最適濃度與時(shí)間的篩選
        3.3.2 3-MA最適濃度與最適時(shí)間的篩選
        3.3.3 樹突狀細(xì)胞經(jīng)不同處理后在倒置熒光顯微鏡下的結(jié)果
        3.3.4 樹突狀細(xì)胞的不同處理組在激光共聚焦下的觀察結(jié)果
        3.3.5 PRRSV病毒載量的變化
        3.3.6 Rapa、3-MA、PRRSV、PRRSV+Rapa、PRRSV+3-MA處理?xiàng)l件下自噬相關(guān)基因以及抗原提呈基因的轉(zhuǎn)錄水平
        3.3.7 Rapa/3-MA預(yù)處理1h后加入PRRSV與Rapa/3-MA與PRRSV同時(shí)加入的自噬與抗原提呈基因的變化
        3.3.8 Werstern Blot檢測(cè)P62的表達(dá)量
        3.3.9 Werstern Blot檢測(cè)Rapa、3-Ma處理對(duì)PRRSV感染樹突狀細(xì)胞自噬水平的影響
    3.4 討論
    3.5 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄 致謝
攻讀學(xué)位期間文章發(fā)表情況


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
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