發(fā)布時間：2021-04-22 07:38

　　高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒（Highly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome virus,HP-PRRSV）是一種重要的病原,在臨床上引起豬的繁殖障礙以及呼吸道疾病,給我國的養(yǎng)豬業(yè)帶來了巨大的損失。在肺部,HP-PRRSV通過感染豬肺泡巨噬細胞（porcine alveolar macrophages,PAMs）導(dǎo)致肺部疾病,主要表現(xiàn)為間質(zhì)性肺炎。需要指出的是,HP-PRRSV感染誘導(dǎo)的炎性反應(yīng)是導(dǎo)致間質(zhì)性肺炎的根本原因。盡管現(xiàn)如今,已有的研究在揭示HP-PRRSV誘導(dǎo)炎性反應(yīng)方面取得了一些進展,但是,具體的機制仍需要進一步研究。Notch信號通路作為一種進化過程中保守的信號通路,通過影響細胞的分化、增生、存活等在宿主發(fā)育中起著必要的作用。除了在調(diào)控細胞命運中起著關(guān)鍵的作用,Notch信號通路在免疫系統(tǒng)中也發(fā)揮著重要的作用。其中,在巨噬細胞細胞激活方面,已有的研究顯示TLR信號通路影響Notch信號通路中受體和配體的表達,繼而通過Notch信號通路調(diào)控炎性因子的分泌以及巨噬細胞的激活。另外,NF-κB信號... 

【文章來源】：中國農(nóng)業(yè)科學院北京市

【文章頁數(shù)】：65 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略表
第一章 引言
    1.1 豬繁殖與呼吸綜合征
        1.1.1 概述
        1.1.2 臨床癥狀
        1.1.3 病理變化
        1.1.4 流行病學
        1.1.5 疾病防控
    1.2 豬繁殖與呼吸綜合征病毒
        1.2.1 概述
        1.2.2 病毒基因組
        1.2.3 致病機制
    1.3 Notch信號通路
        1.3.1 概述
        1.3.2 經(jīng)典Notch信號通路的活化
        1.3.3 非經(jīng)典Notch信號通路
        1.3.4 Notch信號激活的下游基因
        1.3.5 Notch信號通路功能
        1.3.6 Notch信號通路在病毒感染中的作用
    1.4 研究目的及意義
第二章 HP-PRRSV感染通過激活Notch信號通路調(diào)控炎性因子的產(chǎn)生
    2.1 材料
        2.1.1 實驗動物，細胞和病毒
        2.1.2 主要儀器與試劑
    2.2 方法
        2.2.1 PAMs細胞的分離
        2.2.2 PAMs細胞的凍存
        2.2.3 HP-PRRSV的增殖
        2.2.4 病毒含量測定
        2.2.5 PAMs細胞鋪板及HP-PRRSV接種
        2.2.6 γ-分泌酶抑制劑DAPT的使用
        2.2.7 si RNA基因沉默
        2.2.8 PAMs細胞總RNA提取
        2.2.9 PAMs細胞RNA反轉(zhuǎn)錄
        2.2.10 熒光定量PCR
        2.2.11 酶聯(lián)免疫吸附實驗
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 HP-PRRSV感染激活Notch信號通路
        2.3.2 Notch信號通路抑制劑減弱HP-PRRSV感染引起的炎性反應(yīng)
        2.3.3 沉默RBP-J可減弱HP-PRRSV感染引起的炎性反應(yīng)
    2.4 討論
第三章 Jagged1-Notch信號通路調(diào)控HP-PRRSV感染誘導(dǎo)的炎性反應(yīng)
    3.1 材料
        3.1.1 細胞，病毒
        3.1.2 主要儀器與試劑
    3.2 方法
        3.2.1 豬Jagged1基因克隆
        3.2.2 豬Flag14-Jagged1真核表達載體構(gòu)建
        3.2.3 豬Flag14-Jagged1質(zhì)粒提取
        3.2.4 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染 293T細胞
        3.2.5 蛋白提取
        3.2.6 BCA法測定蛋白濃度
        3.2.7 Western blot
        3.2.8 si RNA基因沉默
        3.2.9 PAMs細胞總RNA提取
        3.2.10 PAMs細胞RNA反轉(zhuǎn)錄
        3.2.11 熒光定量PCR
        3.2.12 酶聯(lián)免疫吸附實驗
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 豬Jagged1基因克隆
        3.3.2 豬Flag14-Jagged1載體構(gòu)建
        3.3.3 Flag14-Jagged1轉(zhuǎn)染后的表達情況
        3.3.4 HP-PRRSV感染上調(diào)豬Jagged1蛋白表達
        3.3.5 沉默Jagged1可抑制HP-PRRSV感染誘導(dǎo)的炎性反應(yīng)
        3.3.6 沉默Jagged1表達對Notch靶基因的影響
    3.4 討論
第四章 HP-PRRSV感染上調(diào)Jagged1表達的機制研究
    4.1 材料
        4.1.1 細胞，病毒
        4.1.2 主要儀器與試劑
    4.2 方法
        4.2.1 各類抑制劑使用方法
        4.2.2 PAMs細胞總RNA提取
        4.2.3 PAMs細胞RNA反轉(zhuǎn)錄
        4.2.4 熒光定量PCR
    4.3 結(jié)果
        4.3.1 HP-PRRSV通過NF-κB信號通路誘導(dǎo)Jagged1表達
        4.3.2 HP-PRRSV通過MAPK信號通路誘導(dǎo)Jagged1表達
        4.3.3 HP-PRRSV通過Notch信號通路誘導(dǎo)Jagged1表達
    4.4 討論
第五章 全文結(jié)論
參考文獻
致謝
作者簡歷



本文編號：3153402