禽波氏桿菌（Bordetella avium, B. avium）最早于1967年分離自火雞，該菌引起的禽波氏桿菌病是一種高度接觸傳染性疫病，具有高度上呼吸道接觸傳染性，1周齡內(nèi)的雛禽最易感，主要引起禽類的鼻炎、眼炎等呼吸道癥狀，造成種雞場孵化率降低、死胎率高和弱雛增加。在中國，朱瑞良教授在1991年首次報道了雞波氏桿菌病，隨后從病雞眼中分離得到了禽波氏桿菌（朱瑞良，1994）。禽波氏桿菌可垂直傳播，又可水平傳播。禽波氏桿菌感染的同時，常常繼發(fā)或并發(fā)感染免疫抑制病毒（ALV、REV、CIAV等）、大腸桿菌、肺炎克雷伯氏菌和熒光假單胞菌，使禽波氏桿菌病的危害不斷放大。近幾年，在全國不同地區(qū)經(jīng)流行病學調(diào)查發(fā)現(xiàn)禽波氏桿菌的感染率在10%到50%之間，給我國的養(yǎng)禽業(yè)已經(jīng)造成了巨大的經(jīng)濟損失，對該病做出及時快速的診斷及防控十分必要，因此，禽波氏桿菌快速靈敏的診斷方法的建立和疫苗的制備在預防禽波氏桿菌感染和及時診斷治療方面顯得尤為重要。本研究由以下五個部分組成：1.禽波氏桿菌外膜蛋白單克隆抗體的抗原識別位點分析對本試驗室凍存的3株雜交瘤細胞株（3G10、4A3和4E8）進行復蘇，經(jīng)過3次有限稀釋法... 

【文章來源】：山東農(nóng)業(yè)大學山東省

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【學位級別】：博士

【文章目錄】：
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中文摘要
ABSTRACT
1 引言
    1.1 禽波氏桿菌的研究現(xiàn)狀
        1.1.1 禽波氏桿菌形態(tài)及培養(yǎng)特性
        1.1.2 禽波氏桿菌的生化特性
        1.1.3 禽波氏桿菌的抵抗力
        1.1.4 禽波氏桿菌的致病因子
        1.1.5 禽波氏桿菌病的流行病學
        1.1.6 禽波氏桿菌病的臨床癥狀和病理變化
        1.1.7 禽波氏桿菌病的診斷方法
        1.1.8 禽波氏桿菌病的防治
    1.2 免疫 PCR 的研究進展
        1.2.1 免疫 PCR 的基本原理
        1.2.2 免疫 PCR 的類型
        1.2.3 免疫 PCR 系統(tǒng)
        1.2.4 免疫 PCR 的應用前景
    1.3 本研究的目的意義
2 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 菌株、雜交瘤細胞株、質(zhì)粒
        2.1.2 引物
        2.1.3 試驗動物
        2.1.4 試劑及培養(yǎng)基
        2.1.5 主要培養(yǎng)基和試劑的配制
        2.1.6 儀器
    2.2 方法
        2.2.1 禽波氏桿菌外膜蛋白單克隆抗體的抗原識別位點分析
        2.2.2 免疫 PCR 技術檢測禽波氏桿菌方法的建立
        2.2.3 免疫 PCR 檢測禽波氏桿菌的應用研究
        2.2.4 禽波氏桿菌分離株抗原性與免疫原性差異分析
        2.2.5 禽波氏桿菌亞單位疫苗的研制及免疫效果研究
3 結(jié)果與分析
    3.1 禽波氏桿菌外膜蛋白單克隆抗體的抗原識別位點分析
        3.1.1 禽波氏桿菌外膜蛋白提取結(jié)果
        3.1.2 間接 ELISA 法檢測單克隆抗體效價結(jié)果
        3.1.3 禽波氏桿菌外膜蛋白最適包被濃度測定
        3.1.4 單克隆抗體飽和曲線的制定結(jié)果
        3.1.5 單克隆抗體相加 ELISA 試驗結(jié)果
        3.1.6 Western-blot 鑒定結(jié)果
    3.2 免疫 PCR 技術檢測禽波氏桿菌方法的建立
        3.2.1 禽波氏桿菌分離株 Ba11 和 Ba15 的培養(yǎng)特性
        3.2.2 禽波氏桿菌多克隆抗體效價的測定結(jié)果
        3.2.3 生物素標記的報告 DNA 分子的制備
        3.2.4 報告 DNA 最適濃度的確定
        3.2.5 鏈霉親和素最適濃度的確定
        3.2.6 間接 ELSIA 法對禽波氏桿菌的靈敏度檢測結(jié)果
        3.2.7 免疫 PCR 法對禽波氏桿菌的靈敏度檢測結(jié)果
        3.2.8 免疫 PCR 方法對禽波氏桿菌的特異性檢測結(jié)果
    3.3 免疫 PCR 檢測禽波氏桿菌的應用研究
        3.3.1 實驗室保存菌株的檢測
        3.3.2 病料組織的檢測結(jié)果
        3.3.3 血清樣品的檢測結(jié)果
        3.3.4 人工感染雛雞的癥狀
        3.3.5 免疫 PCR 方法對禽波氏桿菌定植時間的檢測
    3.4 禽波氏桿菌分離株抗原性與免疫原性差異分析
        3.4.1 禽波氏桿菌分離株的培養(yǎng)特性
        3.4.2 禽波氏桿菌分離株抗原性測定結(jié)果
        3.4.3 禽波氏桿菌分離株交叉凝集試驗結(jié)果
        3.4.4 免疫瓊脂擴散試驗結(jié)果
        3.4.5 各免疫組雞血清抗體效價的結(jié)果
        3.4.6 攻毒保護試驗結(jié)果
    3.5 禽波氏桿菌亞單位疫苗的研制及免疫效果研究
        3.5.1 禽波氏桿菌外膜蛋白的提取與含量測定
        3.5.2 松花粉多糖的提取
        3.5.3 禽波氏桿菌亞單位疫苗的制備
        3.5.4 禽波氏桿菌亞單位疫苗的無菌檢驗及安全檢驗結(jié)果
        3.5.5 血清抗體水平的測定結(jié)果
        3.5.6 血液淋巴細胞比率的測定結(jié)果
        3.5.7 脾淋巴細胞轉(zhuǎn)化率的測定結(jié)果
        3.5.8 外周血中 CD4+、CD8+T 淋巴細胞亞群檢測
        3.5.9 血清中 IFN-γ的檢測結(jié)果
        3.5.10 血清中 IL-2 含量的測定
        3.5.11 免疫保護試驗結(jié)果
4 討論
5 結(jié)論
參考文獻
致謝
攻讀學位期間論文發(fā)表、錄用情況


【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
[1]禽波氏桿菌的生物學特性研究及血清分型的初步探索[D]. 馬榮德.山東農(nóng)業(yè)大學 2010
[2]免疫PCR技術檢測腸出血性大腸埃希菌O157：H7[D]. 曹娜娜.吉林大學 2010
[3]禽波氏桿菌OMP單克隆抗體的制備及其生物學特性研究[D]. 劉冠華.山東農(nóng)業(yè)大學 2009
[4]雞主要胚胎性疫病病原人工共感染的試驗研究[D]. 翁立雪.山東農(nóng)業(yè)大學 2009
[5]禽波氏桿菌OMP標記抗體檢測方法的建立及相關毒素生物學特性的檢測[D]. 楊春曉.山東農(nóng)業(yè)大學 2008
[6]用核酸探針和分子斑點雜交技術檢測家禽病毒的核酸[D]. 王漢雷.山東農(nóng)業(yè)大學 2007
[7]免疫PCR檢測HIV-1 p24的實驗研究[D]. 鄭姬.第三軍醫(yī)大學 2007
[8]規(guī)模化種雞場胚胎疾病病原學研究及禽波氏桿菌16SrRNA基因序列分析[D]. 劉紅芹.山東農(nóng)業(yè)大學 2006
[9]應用蛋白芯片和免疫PCR技術高效檢測漢灘病毒的研究[D]. 陳佳.中國科學院研究生院（武漢病毒研究所） 2005



本文編號：3153385