禽白血�。ˋvian leukosis,AL）是由禽白血病病毒（Avian leukosis virus,ALV）引起的雞的一種傳染性腫瘤性疾病。它在全世界廣泛存在,并引起雞免疫抑制、腫瘤、生長發(fā)育遲緩和死亡,每年給家禽業(yè)造成巨大經(jīng)濟損失。迄今為止,尚無有效的疫苗或藥物針對此病。ALV是一種逆轉(zhuǎn)錄病毒,根據(jù)致病性和抗體中和特性在雞群中分為七個亞群（ALV-A/B/C/D/E/J/K）。雖然內(nèi)源性的ALV-E不引起嚴重損害,因為其基因組已廣泛插入宿主雞的細胞基因組中,所以它會干擾外源ALV的測定。另外,由于外源ALV的高變異性以及新亞群、新毒株的不斷出現(xiàn),使得檢測外源ALV變得越來越困難。目前缺乏針對ALV-A檢測的單克隆抗體,而且對其抗原表位也了解甚少。本研究制備出針對ALV-A的單克隆抗體,并鑒定其抗原表位,為單抗的應用提供了科學依據(jù),為建立ALV-A的檢測方法提供了新生物材料。本研究首先利用設計的引物從ALV-A-SDAU09C1病毒的全基因組DNA中擴增gp85基因,將其插入pET-32a表達載體中,將構(gòu)建好的重組質(zhì)粒導入大腸桿菌中,誘導表達gp85蛋白,并進行純化。選取健康的6... 

【文章來源】：山東農(nóng)業(yè)大學山東省

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
符號說明
中文摘要
Abstract
1 引言
    1.1 禽白血病
        1.1.1 禽白血病概述
        1.1.2 禽白血病病原學
        1.1.3 禽白血病的致病性及危害
        1.1.4 禽白血病鑒別診斷
            1.1.4.1 組織病理學檢查
            1.1.4.2 病毒分離和鑒定
            1.1.4.3 ELISA法
            1.1.4.4 IFA法
            1.1.4.5 PCR法
        1.1.5 禽白血病預防控制
    1.2 禽白血病病毒單克隆抗體及其識別抗原表位
        1.2.1 單克隆抗體研制原理概述
        1.2.2 單克隆抗體研制應用概述
        1.2.3 禽白血病病毒單克隆抗體
        1.2.4 禽白血病病毒單克隆抗體應用及其制約因素
    1.3 抗原表位
        1.3.1 抗原表位概述
        1.3.2 抗原表位鑒定及其應用
        1.3.3 禽白血病病毒單克隆抗體抗原表位及其特性
        1.3.4 禽白血病病毒單克隆抗體抗原表位研究存在的問題
    1.4 研究的目的意義
2 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 病毒和細胞來源
        2.1.2 菌種和載體質(zhì)粒
        2.1.3 引物
        2.1.4 主要試劑
        2.1.5 實驗動物
        2.1.6 主要儀器
        2.1.7 實驗地點
    2.2 方法
        2.2.1 ALV-A gp85 基因擴增
        2.2.2 ALV-A gp85 重組表達質(zhì)粒構(gòu)建
        2.2.3 ALV-A gp85 分段擴增和表達
        2.2.4 ALV-A單克隆抗體制備
        2.2.5 ALV-A單克隆抗體特性分析
        2.2.6 ALV-A單克隆抗體線性識別抗原表位western blot分析
        2.2.7 ALV-A單克隆抗體線性識別抗原表位的ELSIA分析
        2.2.8 ALV-A單克隆抗體線性識別抗原表位生物信息分析
        2.2.9 ALV-A單克隆抗體介導的IFA
    2.3 研究平臺
    2.4 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計分析
3 結(jié)果與分析
    3.1 ALV-A單克隆抗體制備
        3.1.1 ALV-A gp85 蛋白基因的擴增與重組表達質(zhì)粒的構(gòu)建
        3.1.2 gp85 重組蛋白的誘導表達及純化
        3.1.3 陽性雜交瘤細胞的篩選以及染色體數(shù)目的鑒定
        3.1.4 腹水的制備
        3.1.5 抗體的純化
    3.2 ALV-A單克隆抗體亞類鑒定
    3.3 ALV-A單克隆抗體特性分析
    3.4 ALV-A單克隆抗體識別抗原表位鑒定
    3.5 ALV-A單克隆抗體識別抗原表位的生物信息分析
    3.6 ALV-A單克隆抗體介導的IFA
4 討論
5 結(jié)論
6 創(chuàng)新點
參考文獻
致謝
攻讀學位期間發(fā)表論文情況


【參考文獻】：
期刊論文
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[3]龍勝鳳雞中一株A亞群禽白血病病毒的基因組分析及其對SPF雞的致病性研究[J]. 許書珍,王一新,李陽,欒懷彪,崔治中,常爽,趙鵬.  中國預防獸醫(yī)學報. 2016(09)
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[7]我國地方品種雞分離到的一個禽白血病病毒新亞群的鑒定[J]. 王鑫,趙鵬,崔治中.  病毒學報. 2012(06)
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博士論文
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[4]東北地區(qū)野生鳥類主要禽免疫抑制病病原感染情況調(diào)查及與REV PR相互作用宿主蛋白的篩選[D]. 姜莉莉.東北林業(yè)大學 2014
[5]A亞群禽白血病病毒單克隆抗體的制備和不同亞群禽白血病病毒共感染相互影響的研究[D]. 邱玉玉.山東農(nóng)業(yè)大學 2011
[6]A亞群禽白血病病毒不同分離株的基因組和生物學特性比較[D]. 張青嬋.山東農(nóng)業(yè)大學 2010
[7]HSP65-HBV多表位融合蛋白乙肝治療性疫苗的研制[D]. 王華.吉林大學 2006
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碩士論文
[1]A亞群禽白血病病毒（ALV-A）膠體金檢測試紙條的研制[D]. 胡衛(wèi)國.山東農(nóng)業(yè)大學 2019
[2]ALV-A對雞、鵪鶉的致病性比較及其亞單位疫苗的免疫保護效果[D]. 張忠勝.山東農(nóng)業(yè)大學 2016
[3]A亞群禽白血病病毒gp85囊膜蛋白原核表達及初步應用[D]. 張丹丹.山東農(nóng)業(yè)大學 2015
[4]鴨群中禽白血病病毒的核酸檢測[D]. 呂佳泓.山東農(nóng)業(yè)大學 2014
[5]抗番鴨呼腸孤病毒σB蛋白單克隆抗體的制備[D]. 陳曉丹.東北農(nóng)業(yè)大學 2009



本文編號：3153334