本試驗通過兩種研究思路研究β-折疊抗菌肽結(jié)構(gòu)與功能關(guān)系,探討其生物學(xué)活性和抑菌機(jī)理。第一個思路是設(shè)計抗菌肽。首先從抗菌肽的氨基酸組成及結(jié)構(gòu)特點出發(fā),設(shè)計了一系列全新的β-發(fā)卡抗菌肽,通過疏水性殘基纈氨酸（V）和陽離子殘基精氨酸（R）的交替連接形成p-發(fā)卡結(jié)構(gòu)的兩條側(cè)鏈,D-脯氨酸（DP）和甘氨酸（G）形成p-轉(zhuǎn)角單元以及側(cè)鏈末端的兩個半胱氨酸（C）連接形成一個二硫鍵,來設(shè)計得到全新的p-發(fā)卡抗菌肽（AC-C（VR）nDPG（RV）nC-NH2, n=1、2、3、4和5）,探討發(fā)卡抗菌肽片層長度與生物學(xué)活性之間的關(guān)系。其次,為了進(jìn)一步驗證片層長度對發(fā)卡肽生物學(xué)活性的影響。截取豬源抗菌肽protegrin-1（PG-1）的β-轉(zhuǎn)角氨基酸序列,分別用4個具有代表性的氨基酸：脂肪族氨基酸異亮氨酸（Ⅰ）、芳香族氨基酸苯丙氨酸（F）、雜環(huán)氨基酸色氨酸（W）和雜環(huán)亞氨基酸脯氨酸（P）與R交替連接延長PG-1轉(zhuǎn)角兩端片層,設(shè)計得到了XR系列肽（XR）nH（RX）n-NH2,（n=1,2;X為I、F、W和P：H為CRRRFC）,探討不同結(jié)構(gòu)來源的疏水性氨基酸與精氨酸構(gòu)成的片層延長結(jié)構(gòu)對其功能的影響。第二... 

【文章來源】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：130 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 引言
    1.1 抗菌肽的分類
        1.1.1 按抗菌肽的來源劃分
        1.1.2 按抗菌肽的結(jié)構(gòu)特征劃分
        1.1.3 按抗菌肽的理化參數(shù)劃分
    1.2 抗菌肽的抑菌機(jī)理
    1.3 抗菌肽分子設(shè)計的研究方法
        1.3.1 全新抗菌肽的設(shè)計方法
        1.3.2 天然抗菌肽的改造方法
        1.3.3 抗菌肽的研究技術(shù)方法
    1.4 雞防御素的研究進(jìn)展
    1.5 研究的目的意義與研究內(nèi)容
2 材料和方法
    2.1 抗菌肽的設(shè)計與合成
        2.1.1 抗菌肽的設(shè)計
        2.1.2 抗菌肽的合成
    2.2 抗菌肽的生物學(xué)活性
        2.2.1 材料
        2.2.2 抑菌活性檢測
        2.2.3 溶血活性檢測
        2.2.4 細(xì)胞毒性檢測
        2.2.5 穩(wěn)定性檢測
        2.2.6 二級結(jié)構(gòu)檢測
        2.2.7 抗菌肽的體內(nèi)抑菌活性
    2.3 抗菌肽的抑菌機(jī)理
        2.3.1 材料
        2.3.2 與脂質(zhì)體的作用
        2.3.3 菌膜的完整性和通透性
        2.3.4 電鏡分析
        2.3.5 凝膠阻滯試驗
    2.4 抗菌肽的真核表達(dá)及活性檢測
        2.4.1 材料
        2.4.2 重組表達(dá)載體的構(gòu)建
        2.4.3 抗菌肽的表達(dá)
        2.4.4 表達(dá)產(chǎn)物的活性檢測
    2.5 統(tǒng)計分析
3 結(jié)果與分析
    3.1 抗菌肽的設(shè)計與改造結(jié)果
        3.1.1 β-發(fā)卡抗菌肽的分子設(shè)計
        3.1.2 AvBD4的分子改造
    3.2 抗菌肽的生物活性
        3.2.1 抑菌活性檢測
        3.2.2 溶血活性和治療指數(shù)
        3.2.3 細(xì)胞毒性檢測
        3.2.4 穩(wěn)定性檢測
        3.2.5 二級結(jié)構(gòu)檢測
        3.2.6 體內(nèi)試驗
    3.3 抗菌肽的抑菌機(jī)理
        3.3.1 與脂質(zhì)體的作用
        3.3.2 菌膜完整性和滲透性
        3.3.3 凝膠阻滯試驗
    3.4 抗菌肽的真核表達(dá)及活性檢測
        3.4.1 基因的優(yōu)化和合成
        3.4.2 重組表達(dá)載體的構(gòu)建
        3.4.3 抗菌肽的表達(dá)
        3.4.4 表達(dá)產(chǎn)物的活性檢測
4 討論
    4.1 抗菌肽的設(shè)計與改造
        4.1.1 β-發(fā)卡抗菌肽的分子設(shè)計
        4.1.2 AvBD4的改造
    4.2 抗菌肽的生物學(xué)活性
        4.2.1 抑菌活性
        4.2.2 細(xì)胞毒性與選擇性
        4.2.3 穩(wěn)定性
        4.2.4 二級結(jié)構(gòu)分析
        4.2.5 抗菌肽在動物體內(nèi)的抑菌效果
    4.3 抗菌肽的抑菌機(jī)理
        4.3.1 與脂質(zhì)體的作用
        4.3.2 膜的完整性和通透性
        4.3.3 與DNA的結(jié)合作用
    4.4 抗菌肽的真核表達(dá)
5 結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)
附錄
攻讀博士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]豬乳鐵蛋白肽的分子改良及改良肽的生物學(xué)活性研究[J]. 韓菲菲,安沙,謝永剛,劉倚帆,汪以真.  動物營養(yǎng)學(xué)報. 2011(02)
[2]抗菌肽抑菌機(jī)制研究進(jìn)展[J]. 黃現(xiàn)青,高曉平,趙改名,李苗云,柳艷霞,張秋會,孫靈霞,袁勇軍.  生物學(xué)雜志. 2010(02)
[3]重組雞β-防御素在畢赤酵母中的表達(dá)及其抑菌活性[J]. 萬雪,趙建增,高英杰,寧官寶,邢海云,喬彥良,李朝陽.  中國獸醫(yī)學(xué)報. 2008(06)
[4]牛抗菌肽Bac7-Bac5融合基因在大腸桿菌中的過表達(dá),純化及抑菌活性[J]. 趙昆,劉思國,王春來,宮強(qiáng),遲磊,劉建東,王勇,云孟克,常月紅,劉慧芳,周媛媛,孫延鳴.  中國生物工程雜志. 2007(03)
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[6]畢赤酵母的密碼子用法分析[J]. 趙翔,霍克克,李育陽.  生物工程學(xué)報. 2000(03)

博士論文
[1]BuforinⅡ抗菌肽的分子設(shè)計及對DNA作用抑菌機(jī)理研究[D]. 郝剛.江南大學(xué) 2009



本文編號：3152233