為了建立特異、靈敏及快速的豬星狀病毒3型（PAstV3）檢測方法并應(yīng)用于臨床檢測,根據(jù)GenBank登錄的PAstV 3序列,在ORF1b保守區(qū)設(shè)計特異性引物和TaqMan探針;經(jīng)過反應(yīng)體系和反應(yīng)條件優(yōu)化,對建立的實時熒光定量RT-PCR方法進(jìn)行敏感性、特異性測定,并初步應(yīng)用于臨床糞便樣品的檢測。結(jié)果顯示,該方法標(biāo)準(zhǔn)曲線線性關(guān)系良好,R2值達(dá)到0.997 1;與多種常見的豬病病毒均無交叉反應(yīng),特異性良好。與常規(guī)PCR相比,該檢測方法敏感性是常規(guī)PCR方法的100倍,敏感性較高,批內(nèi)、批間重復(fù)性試驗的變異系數(shù)均小于2.0%,重復(fù)性良好。使用該方法對臨床收集的30份疑似PAstV3糞便樣本進(jìn)行檢測,陽性率為40%,檢出率高于常規(guī)PCR方法。上述結(jié)果表明,該方法的建立為PAstV3的診斷及流行病學(xué)調(diào)查提供了快速、準(zhǔn)確的檢測手段。 

【文章來源】：中國獸醫(yī)科學(xué). 2020,50(11)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

PAst V3 Taq Man PCR擴(kuò)增曲線（A）和標(biāo)準(zhǔn)曲線（B)

利用常規(guī)PCR方法和熒光定量PCR方法對10倍稀釋的標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒進(jìn)行檢測，結(jié)果顯示，兩種方法檢測最低拷貝數(shù)分別為1.4×103copies/L（圖4A）和1.4×101copies/L（圖4B）。結(jié)果表明，本研究建立的q PCR方法比常規(guī)PCR方法的靈敏度高100倍。圖3 特異性試驗

用5種濃度的質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品（1.4×103～1.4×107copies/L）分別進(jìn)行批內(nèi)和批間的重復(fù)性試驗。結(jié)果顯示，批內(nèi)和批間重復(fù)性試驗的變異系數(shù)均小于2.0%（表2），表明該方法具有良好的重復(fù)性與穩(wěn)定性。2.7 臨床樣品的檢測

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]廣西豬星狀病毒分子流行病學(xué)調(diào)查[J]. 蘭家暖,劉磊,郭旋,張民秀,盧冰霞,黃福標(biāo),覃熊慧,張寧,黃偉堅.  中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報. 2012(08)



本文編號：3142684