禽流感（Avian influenza, AI）是由正粘病毒科流感病毒屬A型AI病毒（Avian influenza virus,AIV）所引起的一種禽類傳染病。近年來，以H5N1亞型為代表的AI的流行使得養(yǎng)禽業(yè)遭受嚴(yán)重?fù)p失，同時對人類健康和世界公共衛(wèi)生安全構(gòu)成重大威脅。疫苗免疫接種是預(yù)防AI有效措施。然而疫苗的大范圍使用，免疫雞群血清學(xué)陽性率極高，與病毒感染途徑引起的血清學(xué)陽性相混淆。這兩種途徑發(fā)生的血清學(xué)改變，通過現(xiàn)有的血清學(xué)檢測技術(shù)均不能鑒別，給AI的監(jiān)控工作帶來一定困擾，因此，很多研究開始關(guān)注AI感染和免疫的鑒別（Differentiation of infected and vaccinatedanimals, DIVA）方法研究。目前對流感病毒感染和免疫的鑒別研究主要集中在非結(jié)構(gòu)蛋白（NS1）上，其中針對NS1的單克隆抗體（MAb）是必不可少的重要基礎(chǔ)，因此，開展了本項研究工作。本研究通過原核表達(dá)獲得了NS1蛋白，濃縮純化后，免疫BALB/c小鼠，利用常規(guī)的MAb制備技術(shù)，將免疫小鼠脾細(xì)胞和SP2/0融合，經(jīng)3⁵次克隆后，共制備2株能穩(wěn)定分泌抗NS1特... 

【文章來源】：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京市

【文章頁數(shù)】：53 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

qRT-PCR流程圖(SakuraiandShibasaki,2012)

NASBA 是以轉(zhuǎn)錄和逆轉(zhuǎn)錄為基礎(chǔ)的等溫核酸擴(kuò)增體系(Compton, 1991)，此方法利用了RTase、RNA 聚合酶、RnaseH、含 T7 啟動子的引物 (primer 1)和反向引物 (primer 2)。NASBA已經(jīng)應(yīng)用于H5和H7亞型HA和M的檢測(Collins et al., 2003a; Collins et al., 2002, 2003b; Lau et al.,2004)，NASBA 的高靈敏性和特異性使它成為檢測流感病毒強(qiáng)有力的工具之一，且它不需要昂貴的儀器如熱循環(huán)儀和熒光檢測器，因此，NASBA 有望在發(fā)展中國家流感診斷中發(fā)揮重要作用。DNA芯片是一種高通量、可平行測定的檢測方法(Pease et al., 1994; Schena et al., 1995)，在流感病毒診斷中發(fā)揮重要作用(Kessler et al., 2004; Li et al., 2001; Riabinin et al., 2010; Ryabinin et al.,2011)。最近報道了用于鑒定流感病毒亞型的通用寡核苷酸芯片(Ryabinin et al., 2011)，包括區(qū)分HA亞型(H1–H13, H15和H16)和NA亞型(N1–N9)的兩套寡核苷酸探針。Huang等(Huang et al., 2009)開發(fā)出一種芯片可同時檢測A型和B型流感病毒，以及區(qū)分H1N1、H3N2和H5N1亞型AIV。Mchip通過流感病毒M基因片段來鑒定流感病毒及其亞型(Dawson et al., 2007; Dawson et al., 2006)，它雜交只用了15個短寡核苷酸。由于DNA芯片檢測數(shù)據(jù)設(shè)備昂貴，它的應(yīng)用有限，但其高通量的特點使其具有良好的發(fā)展前景。圖 1.2 LAMP 流程圖(Sakurai and Shibasaki, 2012)Fig 1.2 Schematic diagram of LAMP (cited by Sakurai and Shibasaki, 2012)

圖 1.3 NASBA 流程圖(Sakurai and Shibasaki, 2012)Fig 1.3 Schematic diagram of NASBA (cited by Sakurai and Shibasaki, 2012)圖 1.4 芯片流程圖(Sakurai and Shibasaki, 2012)Fig 1.4 Schematic diagram of microarry (cited by Sakurai and Shibasaki, 2012)

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]計算機(jī)模建和點突變分析抗人CD40單克隆抗體5C11識別的抗原表位[J]. 張婷,張學(xué)光,瞿秋霞,章良.  中國腫瘤生物治療雜志. 2011(04)

博士論文
[1]惡性瘧原蟲Pf332抗原的免疫原性分析[D]. 杜承.吉林大學(xué) 2010



本文編號：3137409