本文關鍵詞：BMP6基因在雞股骨、脛骨生長板的表達以及其對軟骨細胞增殖分化調(diào)控的探究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：雞的體重和其生產(chǎn)性能的高低取決于骨骼發(fā)育程度,脛長的變化與整個骨架發(fā)育呈強正相關,而且,隨著肉雞的快速生長,腿部疾病也日益增加。研究表明,家禽長骨的生長發(fā)育及成熟都是由一系列因子相互作用實現(xiàn)的。BMP6作為BMPs家族成員之一,可通過Smad信號通路在骨骼發(fā)育中起調(diào)控作用,但長骨的發(fā)生發(fā)育是否與BMP6存在相關?BMP6在調(diào)控骨骼發(fā)育過程中是否還有其他信號通路的參與?迄今尚不清楚。因此,本試驗針對上述的兩個問題進行探究。本試驗采用體型上有較大差異的艾維茵與矮腳黃雞為研究對象,首先利用realtime-PCR技術檢測BMP6基因在雞不同生長時間點的股骨生長板和脛骨生長板兩個組織中的表達情況,探究BMP6與長骨發(fā)育的關系;其次比較兩個品種軟骨細胞的增殖能力及BMP6在不同品種軟骨細胞中的表達情況,從而探討兩個品種軟骨細胞是否存在差異,為后續(xù)試驗提供參考：最后我們以軟骨細胞為模型,進行不同濃度生長激素的誘導,檢測生長激素誘導過程中BMP6的表達量變化,并結(jié)合siRNA干擾技術,檢測干擾BMP6后,軟骨細胞增殖分化相關信號通路中關鍵基因的表達情況,探究了BMP6在軟骨生長過程中的主要作用機制。結(jié)果表明：(1)艾維茵與矮腳黃兩個品種的雞在胚胎期與初生時個體上并沒有顯著差異。且在40日齡時,艾維茵公、母雞各性狀(雞重、腿重、股骨重、脛骨重、股骨長、脛骨長、股骨直徑、脛骨直徑)顯著高于矮腳黃公、母雞；70日齡時,艾維茵公雞除脛骨長/脛骨直徑兩個性狀外,其他性狀顯著高于矮腳黃公雞,艾維茵母雞各性狀顯著高于矮腳黃母雞。(2)BMP6在艾維茵和矮腳黃兩個品種不同時間點的股骨生長板和脛骨生長板中的表達差異不顯著,說明BMP6對雞股骨和脛骨的分化發(fā)育成熟不具有決定性作用,但卻參與了軟骨生長板的分化過程。(3)BMP6在艾維茵與矮腳黃軟骨細胞培養(yǎng)第四天時的表達量均顯著增加,與兩品種軟骨細胞增殖曲線相吻合,但兩者軟骨細胞增殖能力和BMP6在兩品種軟骨細胞的表達量差異均不顯著,這表明BMP6在軟骨細胞增殖分化時高表達。(4)軟骨細胞對50ng/ul生長激素的誘導最敏感,且在48h時增殖明顯,BMP6的表達也顯著(P0.05)升高,表明軟骨細胞增殖時,BMP6高表達。干擾BMP6后,與對照組相比,48h、72h兩個時間點處理組中的Col Ⅱ、ColX表達量都顯著(P0.05)降低,表明軟骨細胞的增殖分化都受到了抑制。因此,我們認為BMP6參與了軟骨細胞增殖分化過程。(5)siRNA干擾BMP6表達時,軟骨細胞增殖分化受阻,IGF1R、JAK2、PKC、 PTH和PTHrP在48h時處理組細胞中的表達量與對照組差異不顯著,而在72h處理組細胞中的表達量顯著低于對照組(P0.05)；且Ihh在48h、72h兩個時間點處理組中的表達與對照組相比都顯著(P0.05)降低。上述結(jié)果說明IGF1R、JAK2、PKC、PTH、Ihh、PTHrP這幾個基因參與了BMP6對軟骨細胞的增殖分化調(diào)控。綜上所述,BMP6主要通過調(diào)控軟骨細胞增殖分化參與雞骨骼早期的發(fā)生發(fā)育,且BMP6的調(diào)控可能與IGF1R、JAK2、PKC、PTH、Ihh、PTHrP這幾個基因有關。
【關鍵詞】：艾維茵雞 矮腳黃雞 軟骨細胞 BMP6基因 增殖分化
【學位授予單位】：四川農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S831.2
【目錄】：

• 摘要5-7
• ABSTRACT7-9
• 英文縮寫詞(ABBREVIATIONS)9-12
• 1 文獻綜述12-21
• 引言12
• 1.1 骨的結(jié)構(gòu)及其發(fā)生12-14
• 1.1.1 膜內(nèi)成骨13
• 1.1.2 軟骨內(nèi)成骨13-14
• 1.2 生長板結(jié)構(gòu)14
• 1.3 生長板軟骨發(fā)育的調(diào)節(jié)14-21
• 1.3.1 激素類對生長板軟骨發(fā)育的調(diào)控15-17
• 1.3.2 生長因子類對生長板軟骨發(fā)育的調(diào)控17-21
• 1.4 本研究的目的意義21
• 2 材料與方法21-30
• 2.1 試驗動物21-22
• 2.2 試驗試劑與耗材22-23
• 2.2.1 主要試劑及試劑盒22
• 2.2.2 常用試劑的配制22-23
• 2.2.3 主要儀器設備23
• 2.2.4 主要應用的生物學軟件23
• 2.3 試驗方法23-30
• 2.3.1 軟骨組織樣品的采集23-24
• 2.3.2 細胞試驗24-27
• 2.3.3 熒光定量PCR27-30
• 2.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析30
• 3 結(jié)果與分析30-41
• 3.1 RNA提取效果的檢測30-31
• 3.2 RT-PCR引物特異性檢測31-33
• 3.3 機體試驗結(jié)果33-35
• 3.3.1 兩個品種個體生長差異33-35
• 3.4 細胞試驗結(jié)果35-41
• 3.4.1 軟骨細胞鑒定結(jié)果35-36
• 3.4.2 兩個品種雞胚軟骨細胞增殖比較及BMP6表達情況36-37
• 3.4.3 生長激素誘導雞胚軟骨細胞后BMP6的表達37-38
• 3.4.4 BMP6基因表達受干擾后細胞中相關基因的表達38-41
• 4 討論41-46
• 4.1 BMP6基因在艾維茵與矮腳黃股骨生長板、脛骨生長板中的表達情況41-42
• 4.2 BMP6基因在不同品種雞軟骨細胞中的表達42-43
• 4.3 BMP6基因?qū)浌羌毎鲋撤只恼{(diào)控43-44
• 4.4 BMP6基因?qū)浌羌毎x相關基因影響44-46
• 5 結(jié)論46-48
• 參考文獻48-54
• 致謝54-55
• 攻讀碩士期間參加的科研項目和發(fā)表文章情況55
• 1. 參加的科研項目55
• 2. 發(fā)表的論文55

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 李振興;陳傳俊;;雌激素降低對大鼠髁突軟骨ERα、ERβ、OPG和RANKL表達的影響[J];上�？谇会t(yī)學;2015年04期

2 楊濤;江波;徐鵬;林剛;;甲狀腺素誘導人臍血間充質(zhì)干細胞向軟骨細胞分化中的作用[J];中國組織工程研究;2015年01期

3 侯寧;楊冠;范雄偉;吳秀山;楊曉;;肥大軟骨細胞特異性表達Cre重組酶轉(zhuǎn)基因小鼠的建立[J];遺傳;2009年01期

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 孫冬梅;決定骨骼發(fā)育的轉(zhuǎn)錄因子的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機制的研究[D];東北師范大學;2009年

  本文關鍵詞：BMP6基因在雞股骨、脛骨生長板的表達以及其對軟骨細胞增殖分化調(diào)控的探究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：312281