本文關(guān)鍵詞：褪黑素對牛精液品質(zhì)、卵母細(xì)胞體外成熟及體外發(fā)育能力影響的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：體外受精技術(shù)(in vitro fertilization,IVF)是體外胚胎生產(chǎn)的重要途徑。提高體外胚胎生產(chǎn)效率能夠為畜牧業(yè)生產(chǎn)提供更多數(shù)量成本更低的胚胎來源。本文研究了褪黑素對牛冷凍-解凍精液品質(zhì)、卵母細(xì)胞體外成熟及胚胎發(fā)育的影響及其可能的作用機(jī)制。研究結(jié)果如下:1、研究了不同濃度褪黑素(0、10-7、10-5、10-3M)對牛冷凍精液品質(zhì)及體外胚胎發(fā)育能力的影響。結(jié)果顯示:(1)10-5M和10-3M褪黑素處理顯著降低了精子細(xì)胞內(nèi)的ROS水平(9.9、6.5 vs 15.0),(P0.05);質(zhì)膜、線粒體膜和頂體完整的精子比例顯著提高(61.3%vs 45.3%、65.5%vs 47.2%、70.9%vs 45.8%),(P0.05),精液品質(zhì)得到明顯改善。(2)與對照組相比,10-3M褪黑素處理精子能顯著提高牛IVF胚胎的囊胚形成率(43.0%vs 34.3%),(P0.05);褪黑素處理組與對照組之間的囊胚細(xì)胞數(shù)沒有顯著差異(P㧐0.05),但10-3M褪黑素處理顯著降低了囊胚凋亡細(xì)胞比例(3.7%vs 6.0%),(P0.05)。(3)10-3M褪黑素處理顯著抑制牛IVF胚胎中促凋亡基因Bax、caspase-3的表達(dá),而抗凋亡基因BCL-2、XIAP和抗氧化酶基因CAT的表達(dá)顯著上調(diào)(P㩳0.05)。2、研究了不同濃度褪黑素(0、10-11、10-9、10-7M)對牛卵母細(xì)胞體外成熟及體外胚胎發(fā)育能力的影響。結(jié)果顯示:(1)與對照組相比,10-11M和10-9M褪黑素處理能夠顯著提高牛卵母細(xì)胞第一極體排出率(82.3%、79.3%vs 74.7%),(P㩳0.05);10-9M褪黑素處理組中線粒體均勻分布的卵母細(xì)胞比例顯著高于對照組和10-11M褪黑素處理組(74.1%vs 60.0%、64.8%),(P㩳0.05);在不同濃度的褪黑素處理組中,皮質(zhì)顆粒在外周和皮質(zhì)區(qū)分布的卵母細(xì)胞比例均顯著高于對照組(P㩳0.05),以10-9M褪黑素處理比例最高(69.1%vs 54.0%)。(2)不同濃度的褪黑素處理卵母細(xì)胞對牛IVF胚胎的卵裂率沒有顯著影響(P㧐0.05),但囊胚形成率均顯著高于對照組(38.6%、42.5%、37.3%vs 32.8%),(P㩳0.05);褪黑素處理組與對照組之間的囊胚細(xì)胞數(shù)沒有顯著差異(P㧐0.05),但囊胚凋亡細(xì)胞比例均顯著下降(P㩳0.05),其中10-9M褪黑素處理凋亡細(xì)胞比例最低(4.5%vs 7.5%)。(3)與對照組相比,10-9M褪黑素處理顯著下調(diào)促凋亡基因caspase-3的表達(dá)(P㩳0.05),而抗凋亡基因BCL-2、XIAP以及抗氧化酶基因CAT和GPx4的表達(dá)水平顯著增加。
【關(guān)鍵詞】：牛 褪黑素 精子 卵母細(xì)胞 胚胎發(fā)育
【學(xué)位授予單位】：甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S823
【目錄】：

• 摘要4-5
• Summary5-10
• 第一章 文獻(xiàn)綜述10-21
• 1 褪黑素的生理功能及作用機(jī)制10-14
• 1.1 褪黑素概述10
• 1.2 褪黑素生物合成、分泌與代謝10-12
• 1.2.1 褪黑素合成途徑10-11
• 1.2.2 褪黑素代謝途徑與代謝產(chǎn)物11-12
• 1.3 褪黑素生物學(xué)作用12-14
• 1.3.1 褪黑素的重要生理功能12-13
• 1.3.2 褪黑素抗氧化作用及其機(jī)制13-14
• 2 褪黑素對家畜繁殖的影響及其應(yīng)用14-18
• 2.1 褪黑素對公畜繁殖機(jī)能的影響15-16
• 2.1.1 褪黑素對精子生成的保護(hù)15-16
• 2.1.2 褪黑素在冷凍精液中的應(yīng)用16
• 2.2 褪黑素對母畜繁殖機(jī)能的影響16-18
• 2.2.1 褪黑素對卵泡發(fā)育的影響16-18
• 2.2.2 褪黑素在卵母細(xì)胞成熟中的應(yīng)用18
• 3 褪黑素在體外受精中的應(yīng)用18-19
• 4 本實驗的目的和意義19-21
• 第二章 褪黑素對牛精液品質(zhì)及體外發(fā)育能力的影響21-36
• 1 材料與方法22-28
• 1.1 試驗材料22
• 1.2 主要試驗儀器22
• 1.3 主要試劑及配制22-24
• 1.4 試驗方法24-28
• 1.4.1 精液品質(zhì)檢測24-26
• 1.4.2 體外受精26
• 1.4.3 胚胎TUNEL檢測26
• 1.4.4 熒光定量PCR26-28
• 1.4.5 數(shù)據(jù)處理28
• 2 結(jié)果與分析28-33
• 2.1 MT處理對精液品質(zhì)的影響28-31
• 2.1.1 MT處理對精子活率的影響28
• 2.1.2 MT處理對精子ROS水平的影響28-29
• 2.1.3 MT處理對精子質(zhì)膜完整率的影響29
• 2.1.4 MT處理對精子頂體完整率的影響29-30
• 2.1.5 MT處理對精子線粒體膜完整率的影響30-31
• 2.2 MT處理精子對體外受精胚胎發(fā)育的影響31-32
• 2.3 MT處理精子對IVF胚胎相關(guān)基因表達(dá)的影響32-33
• 3 討論33-35
• 4 小結(jié)35-36
• 第三章 褪黑素對牛卵母細(xì)胞體外成熟及發(fā)育能力的影響36-45
• 1 材料與方法36-38
• 1.1 試驗材料及試驗儀器36
• 1.2 主要試劑及配制方法36-37
• 1.3 試驗方法37-38
• 1.3.1 卵母細(xì)胞成熟質(zhì)量檢測37
• 1.3.2 體外受精37
• 1.3.3 胚胎TUNEL檢測37
• 1.3.4 熒光定量PCR37
• 1.3.5 數(shù)據(jù)處理37-38
• 2 結(jié)果與分析38-43
• 2.1 不同濃度MT對卵母細(xì)胞成熟的影響38-40
• 2.1.1 對核成熟的影響(第一極體排出率)38
• 2.1.2 對線粒體分布的影響38-39
• 2.1.3 對皮質(zhì)顆粒(CG)分布的影響39-40
• 2.2 MT處理卵母細(xì)胞對體外受精胚胎發(fā)育的影響40-41
• 2.3 MT處理卵母細(xì)胞對體外受精胚胎基因表達(dá)的影響41-43
• 3 討論43-44
• 4 小結(jié)44-45
• 全文結(jié)論45-46
• 參考文獻(xiàn)46-54
• 致謝54-55
• 導(dǎo)師簡介55-56
• 個人簡介56-57

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：312101