本試驗(yàn)從黃芪多糖（APS）調(diào)節(jié)雛雞腸道免疫功能入手,研究chTLR4及其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在此過程中的作用。首先,用Trizol法提取雛雞胸腺中總RNA,反轉(zhuǎn)錄成cDNA,根據(jù)GenBank上已公開發(fā)表的chTLR4基因序列,選擇含有抗原位點(diǎn)較多的區(qū)域設(shè)計(jì)特異性引物,克隆出chTLR4包括胞內(nèi)區(qū)、胞外區(qū)、跨膜區(qū)的部分片段,大小為1332bp,并構(gòu)建重組原核質(zhì)粒pET30a-chTLR4,經(jīng)過誘導(dǎo),表達(dá)出約為58.5KD大小的重組蛋白,利用純化后的重組蛋白成功制備出了兔抗chTLR4多克隆抗體,經(jīng)過間接ELISA、Western-blot和間接免疫熒光方法鑒定所制備的兔抗chTLR4多克隆抗體,其具有良好的反應(yīng)性及特異性。之后,將7日齡雛雞隨機(jī)分為4組,即APS高劑量組（A組）、APS中劑量組（B組）、APS低劑量組（C組）和空白對(duì)照組（D組）。其中,A、B、C組雛雞于7日齡以灌服方式分別給予高、中、低劑量APS,1次/d,連續(xù)5d,在首次給藥后1、3、5、7d,取雛雞十二指腸腸液以及十二指腸、空腸、回腸、法氏囊,采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR、免疫酶組織化學(xué)法及間接ELISA技術(shù)對(duì)雛雞腸道chTLR... 

【文章來源】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：72 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
CONTENTS
摘要
Abstract
1 引言
    1.1 黃芪多糖研究進(jìn)展
    1.2 雛雞腸道黏膜免疫研究進(jìn)展
    1.3 TLR4研究進(jìn)展
    1.4 研究目的和意義
2 材料和方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 黃芪多糖
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2.1.3 工程菌及質(zhì)粒
        2.1.4 主要生物學(xué)試劑、化學(xué)試劑
        2.1.5 主要儀器與設(shè)備
        2.1.6 主要試劑的配制
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 chTLR4多克隆抗體的制備
        2.2.2 chTLR4參與APS調(diào)節(jié)雛雞腸道免疫功能
    2.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析
3 結(jié)果
    3.1 chTLR4基因的克隆、鑒定及體外誘導(dǎo)表達(dá)
        3.1.1 雛雞胸腺總RNA的提取
        3.1.2 chTLR4抗原位點(diǎn)預(yù)測(cè)及跨膜區(qū)分析
        3.1.3 chTLR4基因的擴(kuò)增
        3.1.4 重組菌PCR鑒定
        3.1.5 重組原核質(zhì)粒雙酶切鑒定
        3.1.6 重組原核質(zhì)粒測(cè)序
        3.1.7 重組原核質(zhì)粒體外誘導(dǎo)表達(dá)
    3.2 兔抗chTLR4多克隆抗體的制備及檢測(cè)
        3.2.1 重組蛋白的純化
        3.2.2 間接ELISA方法檢測(cè)兔抗chTLR4多克隆抗體效價(jià)
        3.2.3 Western-blot檢測(cè)多克隆抗體特異性
        3.2.4 重組真核質(zhì)粒的構(gòu)建
    3.3 雛雞腸道chTLR4表達(dá)的動(dòng)態(tài)變化檢測(cè)
        3.3.1 雛雞十二指腸及法氏囊中chTLR4 mRNA表達(dá)動(dòng)態(tài)變化
        3.3.2 雛雞十二指腸、空腸、回腸、法氏囊中chTLR4蛋白表達(dá)動(dòng)態(tài)變化
    3.4 雛雞腸道chTLR4信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路相關(guān)信號(hào)分子mRNA表達(dá)動(dòng)態(tài)變化
    3.5 雛雞腸道細(xì)胞因子chTNF-α、chIFN-β mRNA表達(dá)變化
    3.6 雛雞腸道sIgA含量動(dòng)態(tài)變化
    3.7 雛雞腸道sIgA表達(dá)的動(dòng)態(tài)變化
4 討論
    4.1 兔抗chTLR4多抗的制備
    4.2 黃芪多糖與雛雞腸道免疫
    4.3 chTLR4信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路參與黃芪多糖調(diào)節(jié)雛雞腸道免疫
5 結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)
附錄
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]黃芪多糖調(diào)節(jié)免疫應(yīng)激雛雞免疫功能研究[J]. 賈震虎.  陜西農(nóng)業(yè)科學(xué). 2011(06)
[2]chTLR4及其信號(hào)通路在脂多糖致雞淋巴細(xì)胞中的作用[J]. 張維平,郭維宵,劉海云,張學(xué)慧,楊振國.  中國畜牧獸醫(yī). 2011(03)
[3]黃芪多糖對(duì)脂多糖刺激仔豬小腸組胺的影響[J]. 歐德淵,姚紅艷,劉世會(huì),李秀富,李靜.  動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2009(11)
[4]黃芪多糖對(duì)脾虛小鼠消化吸收功能的影響[J]. 羅燕,谷新利,惠文巧,邵永斌.  黑龍江畜牧獸醫(yī). 2009(17)
[5]黃芪多糖對(duì)腸道免疫功能影響的研究進(jìn)展[J]. 韓立麗,王建發(fā),王鳳龍,韋旭斌.  中國畜牧獸醫(yī). 2009(08)
[6]黃芪多糖對(duì)雞體液免疫增強(qiáng)作用[J]. 張訓(xùn)海,王德云,胡元亮,孫峻嶺.  中國獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2009(03)
[7]硫酸化黃芪多糖對(duì)IBD疫苗接種雛雞免疫水平的影響[J]. 施志玉,黃小燕,李大鵬,孫瑾,鞠演,胡元亮.  畜牧與獸醫(yī). 2009(02)
[8]黃芪多糖對(duì)肉仔雞免疫功能的影響[J]. 司昌德,閔亞宏.  中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2008(12)
[9]黃芪多糖佐劑對(duì)雞禽流感-新城疫重組二聯(lián)苗免疫效果的影響[J]. 羅燕,邵永斌,谷新利,李星艷.  中獸醫(yī)醫(yī)藥雜志. 2008(05)
[10]自制黃芪多糖對(duì)雞免疫功能的影響[J]. 呂信,林春驛,朱冬花,蘭富豪.  中國免疫學(xué)雜志. 2008(05)

博士論文
[1]金欣口服液及白藜蘆醇對(duì)RSV活化誘導(dǎo)的TLR3及其信號(hào)通路的調(diào)控作用[D]. 李佳曦.南京中醫(yī)藥大學(xué) 2012
[2]黃芪多糖的制備及其對(duì)巨噬細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞免疫功能的影響[D]. 趙魯杭.浙江大學(xué) 2011
[3]植物多糖的制備及對(duì)肉仔雞免疫功能影響的研究[D]. 陳洪亮.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2002

碩士論文
[1]TLR4在雞小腸內(nèi)的分布規(guī)律研究[D]. 劉銀雪.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012
[2]雞TLR4信號(hào)通路與腸炎沙門氏菌感染關(guān)系的研究[D]. 宋詠梅.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2010
[3]黃芪多糖對(duì)肉仔雞免疫性能和生產(chǎn)性能影響的研究[D]. 王俊麗.揚(yáng)州大學(xué) 2010
[4]chTLR4及其信號(hào)通路在LPS致雞急性呼吸道損傷中的作用[D]. 劉海云.吉林大學(xué) 2009
[5]雞白痢沙門氏菌致病性及MyD88-依賴途徑信號(hào)分子表達(dá)的研究[D]. 李鵬.河南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2009
[6]雞傳染性法氏囊病病毒主要結(jié)構(gòu)蛋白的克隆與表達(dá)[D]. 朱彩霞.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2009
[7]黃芪多糖增強(qiáng)疫苗免疫效力及機(jī)理研究[D]. 高艷艷.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2006
[8]黃芪多糖粗提物對(duì)肉仔雞生長及代謝調(diào)控的研究[D]. 呂美.河南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2005
[9]黃芪提取物對(duì)雞生長發(fā)育及免疫功能的影響[D]. 李諾.中國農(nóng)業(yè)大學(xué) 2004



本文編號(hào)：3113083