腸炎沙門菌cirA基因缺失株減毒效果及應(yīng)用研究
發(fā)布時間：2021-03-27 20:42
沙門菌給養(yǎng)殖業(yè)和人類健康帶來嚴重危害。目前除抗生素外,對于沙門菌病的防制尚無有效辦法。疫苗,尤其是減毒活疫苗是一個研究方向。疫苗靶點選擇也是沙門菌疫苗研究的核心�；诖竽c菌素受體蛋白CirA在細菌生理上的重要作用,本研究以cirA基因為靶基因。利用λ-Red同源重組技術(shù),構(gòu)建了C50336ΔcirA,并對其生物學特性、LD50和免疫特性進行了評價。具體實施如下:1.腸炎沙門菌rCirA蛋白免疫保護力分析設(shè)計針對性引物擴增cirA基因片段,并成功構(gòu)建了重組質(zhì)粒pEGX-6p-1-cirA,利用原核表達系統(tǒng),表達的rCirA蛋白免疫小鼠,并對免疫小鼠血清進行抗體IgG檢測;以C50336強毒株攻毒評估免疫效果。結(jié)果顯示,經(jīng)SDS-PAGE分析,在70 ku處出現(xiàn)目的蛋白條帶并為沉淀表達;免疫小鼠抗體IgG水平持續(xù)上升;攻毒試驗保護率僅為20%,表明rCirA蛋白對小鼠具有一定的免疫原型和保護力。2.腸炎沙門菌cirA基因缺失株的構(gòu)建及生物學特性分析本研究利用λ-Red同源重組技術(shù),構(gòu)建了腸炎沙門菌cirA基因缺失株以及回補株。研究發(fā)現(xiàn),cirA基因缺失株的生長速率和生...
【文章來源】：河北科技師范學院河北省
【文章頁數(shù)】：74 頁
【學位級別】：碩士
【部分圖文】：
腸炎沙門菌cirA基因的PCR擴增Fig2-1TheamplificationofcirAgeneofS.Enteritidis
第2章腸炎沙門菌rCirA蛋白免疫保護力18圖2-2重組質(zhì)粒pEGX-6p-1-cirA雙酶切驗證Fig2-2VerificationofpEGX-6p-1-cirArecombinantplasmidbydoubleenzymedigestionM:DL2000PlusDNAMarker;1:pEGX-6p-1;2:pEGX-6p-1-cirA2.3.2rCirA重組蛋白的表達驗證將重組載體pEGX-6p-1-cirA轉(zhuǎn)化E.coliBL21（DE3）表達菌株后誘導表達，經(jīng)SDS-PAGE分析rCirA重組蛋白表達情況。結(jié)果顯示，在70ku處呈現(xiàn)出與預期一致的目的蛋白條帶，而誘導的空載體菌株無此蛋白條帶（圖2-3）。表明rCirA重組蛋白正確表達。圖2-3rCirA蛋白表達的SDS-PAGE分析Fig2-3SDS-PAGEanalysisofrCirAproteinexpressionM:PerstainedproteinMarker;1:pEGX-6p-1/BL21;2:pEGX-6p-1-cirA/BL212.3.3rCirA重組蛋白的可溶性分析對rCirA重組蛋白進行可溶性分析，進行SDS-PAGE分析。結(jié)果顯示，rCirA菌體蛋白沉淀中出現(xiàn)較濃的特異蛋白質(zhì)條帶，而上清中無該條帶（圖2-4）。表明rCirA重組蛋白為沉淀表達。
第2章腸炎沙門菌rCirA蛋白免疫保護力18圖2-2重組質(zhì)粒pEGX-6p-1-cirA雙酶切驗證Fig2-2VerificationofpEGX-6p-1-cirArecombinantplasmidbydoubleenzymedigestionM:DL2000PlusDNAMarker;1:pEGX-6p-1;2:pEGX-6p-1-cirA2.3.2rCirA重組蛋白的表達驗證將重組載體pEGX-6p-1-cirA轉(zhuǎn)化E.coliBL21（DE3）表達菌株后誘導表達，經(jīng)SDS-PAGE分析rCirA重組蛋白表達情況。結(jié)果顯示，在70ku處呈現(xiàn)出與預期一致的目的蛋白條帶，而誘導的空載體菌株無此蛋白條帶（圖2-3）。表明rCirA重組蛋白正確表達。圖2-3rCirA蛋白表達的SDS-PAGE分析Fig2-3SDS-PAGEanalysisofrCirAproteinexpressionM:PerstainedproteinMarker;1:pEGX-6p-1/BL21;2:pEGX-6p-1-cirA/BL212.3.3rCirA重組蛋白的可溶性分析對rCirA重組蛋白進行可溶性分析，進行SDS-PAGE分析。結(jié)果顯示，rCirA菌體蛋白沉淀中出現(xiàn)較濃的特異蛋白質(zhì)條帶，而上清中無該條帶（圖2-4）。表明rCirA重組蛋白為沉淀表達。
【參考文獻】：
期刊論文
[1]腸炎沙門菌pagC基因缺失株構(gòu)建及其相關(guān)生物學特性研究[J]. 李永慧,蘇碩青,李巧玲,吳同壘,張志強. 中華醫(yī)院感染學雜志. 2019(22)
[2]復方中藥混菌發(fā)酵制劑對AA肉雞紅細胞免疫功能的影響[J]. 張桂枝,邢啟銀,靳雙星. 中國獸醫(yī)雜志. 2016(07)
博士論文
[1]腸炎沙門氏菌生物被膜形成相關(guān)基因鑒定、缺失株構(gòu)建及生物學特性研究[D]. 董洪燕.揚州大學 2011
碩士論文
[1]腸炎沙門菌nmpC基因缺失株的生物學特性及免疫效果分析[D]. 蘇碩青.河北科技師范學院 2019
[2]雞細胞免疫應(yīng)答檢測方法的建立及其應(yīng)用[D]. 唐娟.揚州大學 2019
本文編號：3104188
【文章來源】：河北科技師范學院河北省
【文章頁數(shù)】：74 頁
【學位級別】：碩士
【部分圖文】：
腸炎沙門菌cirA基因的PCR擴增Fig2-1TheamplificationofcirAgeneofS.Enteritidis
第2章腸炎沙門菌rCirA蛋白免疫保護力18圖2-2重組質(zhì)粒pEGX-6p-1-cirA雙酶切驗證Fig2-2VerificationofpEGX-6p-1-cirArecombinantplasmidbydoubleenzymedigestionM:DL2000PlusDNAMarker;1:pEGX-6p-1;2:pEGX-6p-1-cirA2.3.2rCirA重組蛋白的表達驗證將重組載體pEGX-6p-1-cirA轉(zhuǎn)化E.coliBL21（DE3）表達菌株后誘導表達，經(jīng)SDS-PAGE分析rCirA重組蛋白表達情況。結(jié)果顯示，在70ku處呈現(xiàn)出與預期一致的目的蛋白條帶，而誘導的空載體菌株無此蛋白條帶（圖2-3）。表明rCirA重組蛋白正確表達。圖2-3rCirA蛋白表達的SDS-PAGE分析Fig2-3SDS-PAGEanalysisofrCirAproteinexpressionM:PerstainedproteinMarker;1:pEGX-6p-1/BL21;2:pEGX-6p-1-cirA/BL212.3.3rCirA重組蛋白的可溶性分析對rCirA重組蛋白進行可溶性分析，進行SDS-PAGE分析。結(jié)果顯示，rCirA菌體蛋白沉淀中出現(xiàn)較濃的特異蛋白質(zhì)條帶，而上清中無該條帶（圖2-4）。表明rCirA重組蛋白為沉淀表達。
第2章腸炎沙門菌rCirA蛋白免疫保護力18圖2-2重組質(zhì)粒pEGX-6p-1-cirA雙酶切驗證Fig2-2VerificationofpEGX-6p-1-cirArecombinantplasmidbydoubleenzymedigestionM:DL2000PlusDNAMarker;1:pEGX-6p-1;2:pEGX-6p-1-cirA2.3.2rCirA重組蛋白的表達驗證將重組載體pEGX-6p-1-cirA轉(zhuǎn)化E.coliBL21（DE3）表達菌株后誘導表達，經(jīng)SDS-PAGE分析rCirA重組蛋白表達情況。結(jié)果顯示，在70ku處呈現(xiàn)出與預期一致的目的蛋白條帶，而誘導的空載體菌株無此蛋白條帶（圖2-3）。表明rCirA重組蛋白正確表達。圖2-3rCirA蛋白表達的SDS-PAGE分析Fig2-3SDS-PAGEanalysisofrCirAproteinexpressionM:PerstainedproteinMarker;1:pEGX-6p-1/BL21;2:pEGX-6p-1-cirA/BL212.3.3rCirA重組蛋白的可溶性分析對rCirA重組蛋白進行可溶性分析，進行SDS-PAGE分析。結(jié)果顯示，rCirA菌體蛋白沉淀中出現(xiàn)較濃的特異蛋白質(zhì)條帶，而上清中無該條帶（圖2-4）。表明rCirA重組蛋白為沉淀表達。
【參考文獻】：
期刊論文
[1]腸炎沙門菌pagC基因缺失株構(gòu)建及其相關(guān)生物學特性研究[J]. 李永慧,蘇碩青,李巧玲,吳同壘,張志強. 中華醫(yī)院感染學雜志. 2019(22)
[2]復方中藥混菌發(fā)酵制劑對AA肉雞紅細胞免疫功能的影響[J]. 張桂枝,邢啟銀,靳雙星. 中國獸醫(yī)雜志. 2016(07)
博士論文
[1]腸炎沙門氏菌生物被膜形成相關(guān)基因鑒定、缺失株構(gòu)建及生物學特性研究[D]. 董洪燕.揚州大學 2011
碩士論文
[1]腸炎沙門菌nmpC基因缺失株的生物學特性及免疫效果分析[D]. 蘇碩青.河北科技師范學院 2019
[2]雞細胞免疫應(yīng)答檢測方法的建立及其應(yīng)用[D]. 唐娟.揚州大學 2019
本文編號：3104188
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