發(fā)布時(shí)間：2021-03-27 20:55

　　為了探討云南撒壩豬大腸桿菌HPI主要結(jié)構(gòu)基因及其致病性關(guān)系，主要通過PCR擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)、菌落原位斑點(diǎn)雜交實(shí)驗(yàn)、攝鐵實(shí)驗(yàn)、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和耐藥性實(shí)驗(yàn)等方法研究大腸桿菌的致病關(guān)系。首先對(duì)CVCC1565菌株進(jìn)行PCR擴(kuò)增檢測(cè)得到陽性對(duì)照，再以44株優(yōu)勢(shì)血清型大腸桿菌菌株為材料，以PCR擴(kuò)增和菌落原位斑點(diǎn)雜交方法檢測(cè)高致病性毒力島（HPI） irp2、irp1、 irp3、irp4和irp5基因，測(cè)序，各基因與GENBANK上的序列進(jìn)行比對(duì)得出同源性均在95%以上，另外根據(jù)系統(tǒng)進(jìn)化樹的進(jìn)化距離比較，得出實(shí)驗(yàn)菌株在遺傳學(xué)上具有EIEC、UPEC、Y-pestis、EPEC的特點(diǎn)，蛋白預(yù)測(cè)結(jié)果表明了HPI中HMWP1蛋白條帶的差異與糖基化位點(diǎn)有關(guān)，磷酸化位點(diǎn)參與細(xì)菌的能量代謝和生物氧化，使細(xì)菌能捕獲鐵離子來增強(qiáng)HPI的致病力；SDS-PAGE實(shí)驗(yàn)（濃度為0.2mmol/L2-2’-雙吡啶）在缺鐵的情況下得出10株大腸桿菌優(yōu)勢(shì)血清型HPI菌株具有HMWPs的表達(dá)；CAS固體培養(yǎng)基中菌株能產(chǎn)生橘黃色暈圈；β-內(nèi)酰胺類抗生素藥敏實(shí)驗(yàn)，得出對(duì)頭孢哌酮、頭孢唑啉比較敏感；動(dòng)物致病性實(shí)驗(yàn)得出LD50為102.93μl... 

【文章來源】：云南農(nóng)業(yè)大學(xué)云南省

【文章頁數(shù)】：94 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
基金項(xiàng)目
摘要
Abstract
符號(hào)及縮寫語說明
1 引言
    1.1 HPI 的研究進(jìn)展
        1.1.1 HPI 的基本特征
        1.1.2 耶爾森菌 HPI 與 HPI 的關(guān)系
        1.1.3 大腸桿菌中 HPI 的研究進(jìn)展
    1.2 大腸桿菌β-內(nèi)酰胺藥物的研究進(jìn)展
    1.3 HPI 鐵載體的合成
    1.4 研究的創(chuàng)新點(diǎn)、目的意義
    1.5 研究的主要技術(shù)路線
2 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)菌株及參考菌株
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.1.4 培養(yǎng)基和緩沖液的配制
        2.1.5 主要儀器設(shè)備
        2.1.6 主要計(jì)算機(jī)應(yīng)用軟件
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 優(yōu)勢(shì)血清型大腸桿菌 HPI 主要結(jié)構(gòu)基因的 PCR 檢測(cè)
        2.2.2 優(yōu)勢(shì)血清型大腸桿菌HPI主要結(jié)構(gòu)基因的菌落斑點(diǎn)雜交檢測(cè)
    2.3 優(yōu)勢(shì)血清型大腸桿菌藥敏實(shí)驗(yàn)的判定
    2.4 優(yōu)勢(shì)血清型大腸桿菌菌株高分子量蛋白的表達(dá)
    2.5 優(yōu)勢(shì)血清型大腸桿菌 HPI 鐵載體的檢測(cè)
    2.6 優(yōu)勢(shì)血清型大腸桿菌 HPI 的致病性實(shí)驗(yàn)
        2.6.1 LD50的測(cè)定
        2.6.2 組織病理學(xué)觀察
3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
    3.1 云南撒壩豬大腸桿菌優(yōu)勢(shì)血清型菌株的獲得
    3.2 優(yōu)勢(shì)血清型菌株中 HPI 主要結(jié)構(gòu)基因的檢測(cè)
        3.2.1 菌株中 HPI 主要結(jié)構(gòu)基因的 PCR 檢測(cè)結(jié)果
        3.2.2 菌株中 HPI 主要結(jié)構(gòu)基因的菌落斑點(diǎn)雜交檢測(cè)結(jié)果
        3.2.3 菌株中 HPI 主要結(jié)構(gòu)基因的檢測(cè)結(jié)果及相關(guān)性分析
        3.2.4 HPI 主要結(jié)構(gòu)基因測(cè)序結(jié)果的同源性比較
        3.2.5 HPI 主要結(jié)構(gòu)基因測(cè)序結(jié)果的進(jìn)化樹的構(gòu)建
        3.2.6 HPI 主要結(jié)構(gòu)基因測(cè)序結(jié)果的蛋白質(zhì)預(yù)測(cè)分析
    3.3 優(yōu)勢(shì)血清型大腸桿菌中 HPI 攝鐵功能的比較
        3.3.1 HPI 鐵載體的檢測(cè)
        3.3.2 HPI 實(shí)驗(yàn)菌株中 HMWPS 蛋白的表達(dá)
    3.4 HPI 實(shí)驗(yàn)菌株中β-內(nèi)酰胺類藥物的藥敏實(shí)驗(yàn)
    3.5 致病性實(shí)驗(yàn)與優(yōu)勢(shì)血清型大腸桿菌 HPI 菌株關(guān)系
        3.5.1 LD50實(shí)驗(yàn)與與優(yōu)勢(shì)血清型大腸桿菌 HPI 菌株關(guān)系
        3.5.2 HE 染色病理切片與優(yōu)勢(shì)血清型大腸桿菌 HPI 菌株關(guān)系
4 討論
    4.1 含有 HPI 主要結(jié)構(gòu)基因優(yōu)勢(shì)血清型大腸桿菌菌株的致病性及攝鐵功能
    4.2 優(yōu)勢(shì)血清型大腸桿菌 HPI 高分子量蛋白的表達(dá)和蛋白預(yù)測(cè)結(jié)果的關(guān)系
    4.3 優(yōu)勢(shì)血清型大腸桿菌藥敏實(shí)驗(yàn)與 HPI 的關(guān)系
5 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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本文編號(hào)：3104207