以H1N1亞型豬流感病毒A∕swine∕Shanghai∕3∕2014為模板,選擇核定位序列（Nuclear localization sequence,NLS1）與核輸出序列（Nuclear export sequence,NES）區(qū)域中5個(gè)保守關(guān)鍵氨基酸突變?yōu)楸彼?構(gòu)建真核表達(dá)載體,分析NLS1和NES區(qū)域中影響NS1蛋白定位及細(xì)胞因子水平的氨基酸位點(diǎn)。結(jié)果表明:NS1L36A、NS1L141A、NS1L146A與野生型NS1蛋白相似,轉(zhuǎn)染后在細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核中均可檢測(cè)到蛋白表達(dá)。NS1R38A有少量進(jìn)入細(xì)胞核,而NS1L144A蛋白主要分布在細(xì)胞質(zhì)中,不進(jìn)核。NS1R38A和NS1L144A表達(dá)載體轉(zhuǎn)染細(xì)胞,細(xì)胞內(nèi)Ⅰ型干擾素β（IFN-β）和抗病毒蛋白（OAS-1）水平升高,與野生型NS1蛋白比較差異顯著。因此,NS1蛋白中第38位和第144位氨基酸的突變可以減輕其對(duì)宿主細(xì)胞抗病毒免疫應(yīng)答的抑制,但這兩個(gè)突變蛋白在細(xì)胞中定位和分布不同顯示其作用機(jī)制可能不同。 

【文章來(lái)源】：上海農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào). 2020,36(06)

【文章頁(yè)數(shù)】：6 頁(yè)

【部分圖文】：

NS1點(diǎn)突變質(zhì)粒的構(gòu)建與鑒定

NS1及其突變體在A549細(xì)胞中的表達(dá)

將各質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染A549細(xì)胞,利用間接免疫熒光分析NS1及其點(diǎn)突變蛋白在細(xì)胞中的定位情況。結(jié)果表明:在轉(zhuǎn)染12 h、24 h、36 h后,NS1、NS1L36A、NS1L141A、NS1L146A均勻分布在A549的細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)中,NS1L36A、NS1L141A、NS1L146A突變體蛋白與野生型NS1蛋白在細(xì)胞中的分布沒(méi)有差異;在轉(zhuǎn)染24 h時(shí),NS1R38A在細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)中均有分布,在轉(zhuǎn)染36 h時(shí),NS1R38A蛋白主要在細(xì)胞質(zhì)中,細(xì)胞核中很少。而NS1L144A主要分布在細(xì)胞質(zhì)中,基本不分布于細(xì)胞核,說(shuō)明NS1蛋白中第144位氨基酸與蛋白定位密切相關(guān)(圖3)。2.4 熒光定量PCR檢測(cè)免疫細(xì)胞因子的m RNA轉(zhuǎn)錄水平

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]甲型流感病毒NS1、NS2和NS3蛋白的研究進(jìn)展[J]. 譚偉,謝芝勛.  畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2014(12)



本文編號(hào)：3104134