單核細(xì)胞增生李斯特氏菌（Listeria monocytogenes, LM）是一種人畜共患的兼性細(xì)胞內(nèi)寄生菌,并且是20世紀(jì)末世界衛(wèi)生組織WTO列為四種最重要的食源性病原微生物之一,分布廣泛,易感人群較多,可引起人類和動物的膿血癥、流產(chǎn)、腦膜炎和胃腸炎等臨床癥狀,同時(shí)也可以引起流產(chǎn)及通過胎盤引起新生兒的膿血癥。其中InlA基因是LM的重要的毒力基因,InlA（內(nèi)化素A）由800個(gè)氨基酸殘基組成,為LM入侵人上皮細(xì)胞所必需,其受體為E-鈣粘素,是最早鑒定出的與細(xì)菌侵襲相關(guān)的毒力因子,為被非吞噬細(xì)胞內(nèi)化所必需,是LM所特有,不存于非致病性LM膜表面。制備針對單增李斯特菌膜表面蛋白InIA的高親和力高特異性的抗體是建立研究LM侵入細(xì)胞時(shí)InlA各段蛋白重要性的基礎(chǔ)。本研究通過克隆單核細(xì)胞增生李斯特氏菌特異性的膜表面蛋白InternalinA （InlA）,獲得LM特異性的膜表面蛋白InlA抗體,分析其氨基酸組成和蛋白結(jié)構(gòu),經(jīng)免疫家兔獲得多克隆抗體,從而分段制備LM特異性的抗體。為研究與分析InlA蛋白入侵細(xì)胞時(shí)各段相關(guān)蛋白發(fā)揮的作用奠定了物質(zhì)基礎(chǔ)。利用生物軟件設(shè)計(jì)單核細(xì)胞增生李斯特氏菌In... 

【文章來源】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：49 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 前言
    1.1 LM的生物學(xué)特性
        1.1.1 LM的形態(tài)結(jié)構(gòu)
        1.1.2 LM的生化特征
    1.2 LM的毒力因子
        1.2.1 LM的致病機(jī)理
        1.2.2 LM的毒力因子級
        1.2.3 LM表面蛋白InlA和InlB
        1.2.4 InlA介導(dǎo)的LM內(nèi)化途徑（InlA/E-cad）
    1.3 LM的檢測方法
        1.3.1 傳統(tǒng)的分離鑒定
        1.3.2 免疫學(xué)檢測方法
        1.3.3 分子生物學(xué)檢測
    1.4 研究的目的意義
2 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 病毒株及主要實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.2 載體與質(zhì)粒
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)動物
        2.1.4 引物設(shè)計(jì)與合成
        2.1.5 主要試劑
        2.1.6 主要溶液配制
        2.1.7 主要實(shí)驗(yàn)儀器與設(shè)備
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 InlA基因的獲得
        2.2.2 重組原核表達(dá)載體的陽性重組質(zhì)粒的鑒定
        2.2.3 InlA分段基因在大腸桿菌中的可溶性表達(dá)
        2.2.4 InlA多克隆抗體的制備
3 結(jié)果
    3.1 InlA分段基因的克隆結(jié)果
        3.1.1 InlA分段基因的擴(kuò)增結(jié)果
        3.1.2 重組質(zhì)粒的鑒定結(jié)果
    3.2 InlA分段基因基因重組大腸桿菌的構(gòu)建
    3.3 InA分段基因在大腸桿菌中的誘導(dǎo)表達(dá)分析
        3.3.1 SDS-PAGE分析
        3.3.2 可溶性表達(dá)產(chǎn)物的分析及誘導(dǎo)時(shí)間的摸索結(jié)果
        3.3.3 可溶性表達(dá)產(chǎn)物的純化結(jié)果
    3.4 InlA分段生物活性的檢測
        3.4.1 表達(dá)產(chǎn)物的Western blot鑒定
        3.4.2 天然InlA蛋白提取的Western blot鑒定
        3.4.3 動物血清的Western blot鑒定
        3.4.4 動物血清效價(jià)的ELISA結(jié)果
        3.4.5 LM在小鼠體內(nèi)定植試驗(yàn)結(jié)果
4 討論
    4.1 LM蛋白的分段依據(jù)
    4.2 影響LM蛋白分段表達(dá)的因素
    4.3 InlA主要功能區(qū)的確定
5 結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)
附錄
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
[1]單增李斯特菌ActA的表達(dá)、免疫原性及膠體金試紙研制[D]. 張輝.吉林大學(xué) 2008



本文編號：3099552