發(fā)布時(shí)間：2021-03-25 10:27

　　偽狂犬�。≒seudorabies,PR）是由偽狂犬病病毒（Pseudorabies virus,PRV）引起的多種家畜及野生動(dòng)物的一種以發(fā)熱、奇癢、腦脊髓炎、呼吸和神經(jīng)系統(tǒng)障礙為主要特征的急性傳染病。PRV是一種嗜神經(jīng)性病毒,感染豬只后,可在其體內(nèi)建立潛伏感染。疫苗在該病的防控中發(fā)揮了重要的作用,但是現(xiàn)有疫苗不能夠阻止?jié)摲腥镜慕⑴c再激活,而且血清學(xué)方法不能夠檢測(cè)到處于潛伏感染狀態(tài)的PRV。在一定條件下,潛伏狀態(tài)的PRV可以被重新激活,從而導(dǎo)致排毒并引發(fā)疫情,這非常不利于PR的防控及根除。因此,研制一種能夠清除潛伏感染狀態(tài)PRV的方法極為必要。本研究首先利用同源重組的方法構(gòu)建了一株重組報(bào)告病毒rPRVTJ-US9-EGFP,經(jīng)熒光觀察、PCR和一步生長(zhǎng)曲線鑒定,獲得了一株能穩(wěn)定表達(dá)綠色熒光、且生長(zhǎng)特性與親本病毒一致的報(bào)告病毒。我們通過分離新生鼠背根神經(jīng)節(jié)（Dorsal root ganglion,DRG）獲取感覺神經(jīng)細(xì)胞,并以抗βⅢ-tubulin抗體利用間接免疫熒光試驗(yàn)對(duì)神經(jīng)細(xì)胞進(jìn)行了鑒定。為了獲得純凈的感覺神經(jīng)細(xì)胞,我們利用抑制有絲分裂的藥物阿糖胞苷（Cytosine arab... 

【文章來源】：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京市

【文章頁數(shù)】：56 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

PRV的復(fù)制周期（引自Pomeranzetal.,2005）

16圖 2.2 重組病毒 rPRVTJ-US9-EGFP 的鑒定Fig. 2.2 Identification of rPRVTJ-US9-EGFPA 為重組病毒的熒光表達(dá)情況；B 為對(duì) gB 和 EGFP 基因的 PCR 鑒定；C 為重組病毒的一步生長(zhǎng)曲 獲得所需的小鼠感覺神經(jīng)元新生鼠分離的 DRG 經(jīng)消化后，接種到 96 孔細(xì)胞培養(yǎng)板，培養(yǎng) 3 d 后可見明顯的軸突斷延長(zhǎng)。應(yīng)用抗 βⅢ-tubulin 抗體進(jìn)行間接免疫熒光試驗(yàn)，可見典型的神經(jīng)胞體和軸突形

碩士學(xué)位論文 第二章 偽狂犬病病毒潛伏感 EGFP 基因的存在（圖 2.2B），該重組病毒與 PRVTJ 株親本毒相比，C），蝕斑大小和形態(tài)無明顯差異。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]CRISPR/Cas9技術(shù)在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的非病毒及病毒載體[J]. 何治堯,秦舟,門可,楊陽,徐珽,魏于全.  中國(guó)科學(xué):生命科學(xué). 2017(11)
[2]CRISPR/Cas系統(tǒng)最新研究進(jìn)展[J]. 劉妮,陸沁,劉娟,陳航.  生物技術(shù)通報(bào). 2017(02)
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博士論文
[1]豬偽狂犬病病毒（HNX株）的生物學(xué)特性與比較基因組學(xué)研究[D]. 余騰.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016
[2]偽狂犬病病毒變異株基因工程疫苗研究[D]. 胡睿銘.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016

碩士論文
[1]應(yīng)用CRISPR/Cas9技術(shù)快速敲除偽狂犬病毒毒力基因的研究[D]. 劉繼婷.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué) 2017
[2]潛伏感染期偽狂犬病病毒EPO基因甲基化狀態(tài)分析[D]. 余秋穎.河南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2014
[3]含GFP報(bào)告基因的偽狂犬病病毒Ea株gG基因缺失重組病毒的構(gòu)建[D]. 王鑫.河南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2008



本文編號(hào)：3099532