腦心肌炎病毒（Encephalomyocarditis virus, EMCV）為單股正鏈RNA病毒,屬微RNA病毒科、心病毒屬的成員,是豬腦心肌炎的病原體,同時(shí)也是一種傳播廣泛的自然疫源性人畜共患病病原。目前,我國豬場(chǎng)已經(jīng)發(fā)現(xiàn)該病毒的感染,但是對(duì)其流行情況并不是十分明確,因此并沒有很好的追蹤和預(yù)防的方法。EMCV 3C蛋白酶具有一個(gè)半胱氨酸親核作用的活性位點(diǎn),它幾乎參與了EMCV病毒蛋白后期所有的水解過程,其原核表達(dá)產(chǎn)物3C蛋白具有良好的免疫原性。本文對(duì)EMCVHB10分離株的3C基因進(jìn)行克隆,構(gòu)建了原核表達(dá)載體,并獲得了原核表達(dá)的3C蛋白,制備了EMCV 3C蛋白的單克隆抗體,為該病毒的流行病學(xué)和分子診斷奠定了基礎(chǔ)。有研究表明,EMCV感染可以誘導(dǎo)模式識(shí)別受體（RIG-I）的降解,細(xì)胞也可以通過另外一種識(shí)別RNA的受體（MDA5）來感應(yīng)EMCV的侵襲,從而激活Ⅰ型干擾素信號(hào)通路及抑制病毒的增殖。但是也有研究表明,EMCV 3C蛋白是可以抑制IFNP信號(hào)通路的激活�；谶@樣的研究爭(zhēng)議,EMCVHB10株對(duì)Ⅰ型干擾素的影響是有必要深入探究。首先EMCVHB10接種BHK-21細(xì)胞,接毒... 

【文章來源】：長(zhǎng)江大學(xué)湖北省

【文章頁數(shù)】：77 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

I型干擾素介導(dǎo)的通路模式圖

?第２竄猜腦心肌炎服］０?：化’蛋ｎ的單妃隆抗體的制備???Ｌａｎｅ?Ｍ：?Ｐｒｅ－ｓｔｒａｉｎｅｄ?Ｐｒｏｋｉｎ?Ｍａｒｋｅｒ；?Ｌａ打ｅ?Ｉ；?Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ?ｐＥＴ－２８ａ－３Ｃ?ｓｔｒａｉｎ?ｎｏｎｉｎｄｕｃｅｄ?ｂｙ?ＩＰＴＧ；??Ｌａｎｅ?２：?Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ?ｐＥＴ－２８ａ－３Ｃ?ｓｔｒａｉｎ?ｉｎｄｕｃｅｄ?ｂｙ?ＩＰＴＧ；??

２．?３．?３．１?Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ分析３Ｃ單克隆抗體的特異性??用Ｍ餅為０．１的ＥＭＣＶ感染ＢＨＫ－２１細(xì)胞，感染１２?ｈ后用時(shí)ｚｏｌ對(duì)細(xì)胞進(jìn)行??裂解，通過Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ分析，檢測(cè)ＥＭＣＶ３Ｃ的表達(dá)情況，結(jié)果如圖２－６所示，??使用２Ａ單克隆抗體能特異性的檢測(cè)到２Ａ蛋白。??ＥＭＣＶ?■?＋??扣�。a(bǔ)＞仁３Ｃ??１０邸’：??圖２－６?ＥＭＣＶ?３Ｃ單克隆抗體的特昇性的Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ鑒定??Ｆｉｇ．２－６?Ｗｅｓｌ：ｅｍ?ｂｌｏｔ?ａｎａｌｙｓｉｓ?ｏｆ?ＥＭＣＶ?３Ｃ?ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ?ａｎｔ化ｏｄｙ?ｓｐｅｄｆｉｃｉｔｙ??２．?３．?３．?２間接免疫黃光分析％單克隆抗體特異性??ＢＨＫ－２１細(xì)胞被ＭＯＩ為０．１的ＥＭＣＶ感染，并且用ＰＣＡＧＧＳ－ＨＡ－３Ｃ轉(zhuǎn)染ＨＥＫ??２９３?Ｉ細(xì)胞，２４?ｈ后對(duì)細(xì)胞進(jìn)行處理，通過間接免疫羨光（ＩＦＡ）觀察顯示，在??ＰＣＡＧＧＳ－ＨＡ－３Ｃ轉(zhuǎn)染ＨＥ２９３?Ｔ細(xì)胞和接毒的ＢＨＫ－２１細(xì)胞中都能觀察到特異性的??巧光

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
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