羊毛產(chǎn)業(yè)是我國畜牧業(yè)的重要產(chǎn)業(yè)之一,產(chǎn)毛性能的遺傳改良對提高養(yǎng)羊業(yè)的經(jīng)濟(jì)效益有重要的意義,目前轉(zhuǎn)基因技術(shù)的發(fā)展和應(yīng)用為產(chǎn)毛性能的改良提供了新的途徑。皮膚毛囊的發(fā)育直接影響著羊毛的產(chǎn)量和品質(zhì),因此克隆鑒定可驅(qū)動外源基因在綿羊毛囊中特異表達(dá)的毛囊組織特異型啟動子,是利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)改良羊毛纖維品質(zhì)的基礎(chǔ)。因此,本研究以綿羊毛囊中特異表達(dá)的角蛋白和角蛋白關(guān)聯(lián)蛋白為候選基因,克隆綿羊毛囊特異表達(dá)基因上游調(diào)控序列,目的是為利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)改良綿羊產(chǎn)毛性能提供基因表達(dá)調(diào)控元件。本研究采集了藏綿羊毛囊,皮膚（包含毛囊）,心臟,肝臟,脾臟,肺,腎,瘤胃,皺胃,直腸,十二指腸,淋巴,脂肪,肌肉,睪丸,卵巢組織,利用PCR和q-PCR技術(shù),篩選出綿羊毛囊特異表達(dá)基因,克隆其上游調(diào)控序列,同時通過RNA原位雜交的方法對其在綿羊毛囊中的表達(dá)位置進(jìn)行檢測,得到如下結(jié)果：1)綿羊皮膚（包含毛囊）特異表達(dá)基因的篩選。根據(jù)NCBI Unigene的電子表達(dá)譜提供的綿羊皮膚（包含毛囊）特異表達(dá)候選基因的信息,通過RT-PCR對這些候選基因驗(yàn)證,得到一些綿羊皮膚,毛囊特異表達(dá)候選基因KRTAP6.1,KRTAP3.3,KRT... 

【文章來源】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞表（Abbreviations）
1 前言
    1.1 研究問題由來
    1.2 毛囊及毛囊生物學(xué)
        1.2.1 毛囊的發(fā)生
        1.2.2 毛囊的形態(tài)結(jié)構(gòu)
        1.2.3 毛囊的類型
        1.2.4 毛囊的周期性生長
    1.3 毛發(fā)纖維的結(jié)構(gòu)特性和成分
        1.3.1 角蛋白
        1.3.2 角蛋白關(guān)聯(lián)蛋白
    1.4 特異表達(dá)啟動子的研究現(xiàn)狀
        1.4.1 啟動子的結(jié)構(gòu)和分類
        1.4.2 啟動子的研究方法
    1.5 研究目的和意義
2 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 組織樣品
        2.1.2 菌株和質(zhì)粒
    2.2 方法
        2.2.1 本研究的技術(shù)路線
        2.2.2 RT-PCR法鑒定候選基因表達(dá)模式
            2.2.2.1 綿羊毛囊RNA抽提
            2.2.2.2 綿羊各組織RNA抽提
            2.2.2.3 cDNA的獲得
            2.2.2.4 候選基因表達(dá)模式的鑒定
        2.2.3 通過q-PCR的方法對綿羊毛囊特異表達(dá)基因的進(jìn)行鑒定
        2.2.4 綿羊KRTAP13.1,KRTAP3.3基因上游調(diào)控序列的克隆
        2.2.5 KRTAP13.1P-ZSGreenl-1表達(dá)載體構(gòu)建
        2.2.6 綿羊KRTAP13.1基因原位雜交定位分析
            2.2.6.1 綿羊皮膚切片制作
            2.2.6.2 RNA原位雜交
3 結(jié)果
    3.1 藏綿羊各組織RNA提取結(jié)果
    3.2 15個綿羊皮膚和毛囊特異表達(dá)基因組織表達(dá)譜鑒定結(jié)果
    3.3 10個綿羊毛囊特異表達(dá)候選基因q-PCR鑒定結(jié)果
    3.4 綿羊KRTAP13.1,KRTAP3.3基因上游調(diào)控序列的克隆
    3.5 KRTAP13.1基因啟動子表達(dá)載體的構(gòu)建及轉(zhuǎn)基因小鼠的制作
    3.6 綿羊KRTAP13.1基因原位雜交結(jié)果
    3.7. 綿羊與其它物種KRTAP13.1基因編碼區(qū)核苷酸序列的比較結(jié)果
    3.8 綿羊KRTAP13.1蛋白進(jìn)化分析
    3.9 綿羊KRTAP13.1蛋白的二級結(jié)構(gòu)分析
    3.10 綿羊KRTAP13.1蛋白氨基酸組成分析
4 討論
    4.1 轉(zhuǎn)基因動物育種技術(shù)對提高羊毛品質(zhì)的重要作用
    4.2 關(guān)于綿羊毛囊特異表達(dá)基因的篩選方法
    4.3 關(guān)于啟動子表達(dá)載體的構(gòu)建
    4.4 綿羊KRTAP13.1基因在毛囊中特異表達(dá)
    4.5 報告基因的選擇
5 小結(jié)
    5.1 本研究的主要結(jié)論和成果
    5.2 本研究的創(chuàng)新點(diǎn)和特色
    5.3 本研究的不足和下一步工作建議
參考文獻(xiàn)
附錄：在讀期間發(fā)表論文情況
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]影響羊毛品質(zhì)的因素及控制措施[J]. 張敏,王樂,鄭文新.  草食家畜. 2010(03)
[2]CMV啟動子與艾美耳球蟲基因側(cè)翼序列對黃色熒光蛋白表達(dá)調(diào)控作用的研究[J]. 李繼東,丁林軍,何生虎.  江西農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報. 2009(06)
[3]綿羊毛發(fā)角蛋白結(jié)合蛋白啟動子的克隆與活性分析[J]. 王春生,安鐵洙,白秀娟,任洪林,柳增善.  中國獸醫(yī)學(xué)報. 2008(02)
[4]轉(zhuǎn)基因動物技術(shù)與動物育種[J]. 魯紹雄,連林生.  云南畜牧獸醫(yī). 2002(03)



本文編號：3087752